[发明专利]短小芽孢杆菌及其培养方法和用途

权利要求书

1.一种短小芽孢杆菌，其特征是：保藏名称为：Bacillus pumilus 223，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国 武汉 武汉大学；保藏日期：2010年4月8，保藏号：CCTCC NO：M2010075。

2.如权利要求1所述的短小芽孢杆菌的培养方法，其特征是包括如下步骤：

1)、固体平板培养：用接种环蘸取Bacillus pumilus 223 CCTCC NO：M2010075在PDA固体培养基上划线接种，于35℃培养12h，得到菌种I；所述菌种I能在4℃下保存3个月；

2)、液体摇瓶培养：取一环菌种I接入装有100ml PD液体培养基的容器中，于35℃、200r/min培养12h，得到菌种II；所述菌种II为Bacillus pumilus 223 CCTCC NO：M2010075。

3.根据权利要求2所述的短小芽孢杆菌的培养方法，其特征是：

所述PDA固体培养基的制备方法如下：将土豆200g加800ml水煮沸30min，用纱布过滤，得滤液；在所得滤液中加入葡萄糖20g和琼脂18g，加水至1000ml，自然pH，121℃灭菌20min，得PDA固体培养基；

所述PD液体培养基的制备方法如下：将土豆200g加800ml水煮沸30min，用纱布过滤，得滤液；在所得滤液中加入葡萄糖20g，加水至1000ml，自然pH，121℃灭菌20min，得PD液体培养基。

4.一种抗菌活性物质的制备方法，其特征是依次包括如下步骤：

1)、取Bacillus pumilus 223 CCTCC NO：M2010075在PDA培养基上划线，35℃下培养24h；

2)、用接种环蘸取PDA平板上长出的单菌落，接入装有100ml SMA液体培养基的容器中，于35℃、200r/min培养30h；

3)、取100μl步骤2)所得的菌液均匀涂布于SMA固体培养基上，在超净工作台中吹干后，于35℃下倒置培养48h；

4)、用含质量浓度2％NaCl的50mM磷酸缓冲液(pH 7.0)浸泡步骤3)的所得物，1h后将浸泡液离心，得上清液；

5)、按照每100ml上清液加入37～41克(NH₄)₂SO₄的比例，在所述上清液中加入固体(NH₄)₂SO₄，于0～4℃放置10～14小时，然后于12000r/min离心20min，所得沉淀用50mM磷酸缓冲液(pH 7.0)重溶后，即为抗菌活性物质粗提液。

5.根据权利要求4所述的抗菌活性物质的制备方法，其特征是：

所述SMA液体培养基为：(NH₄)₂SO₄ 2.0g，KH₂PO₄ 6.0g，K₂HPO₄ 14.0g，NaCitrate·3H₂O1.0g，MgSO₄·7H₂O 0.2g，葡萄糖4.0g，加水至1000ml；自然pH，121℃灭菌20min；

所述SMA固体培养基为：(NH₄)₂SO₄ 2.0g，KH₂PO₄ 6.0g，K₂HPO₄ 14.0g，NaCitrate·3H₂O1.0g，MgSO₄·7H₂O 0.2g，葡萄糖4.0g，琼脂18g，加水至1000ml；自然pH，121℃灭菌20min。

6.如权利要求1所述的短小芽孢杆菌的用途，其特征是：用于防治水稻纹枯病。

7.如权利要求4或5所述方法制备而得的抗菌活性物质的用途，其特征是：用于防治水稻纹枯病。