[发明专利]检测虾过敏原的免疫胶体金层析试纸条及其制备方法无效
| 申请号： | 201010201694.7 | 申请日： | 2010-06-08 |
| 公开（公告）号： | CN101881769A | 公开（公告）日： | 2010-11-10 |
| 发明（设计）人： | 胥传来;邓小芳;勇倩倩;马文蔚;陈莲君;严文静;屈昌龙;吴晓玲 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | G01N33/558 | 分类号： | G01N33/558;G01N33/532 |
| 代理公司： | 无锡市大为专利商标事务所 32104 | 代理人： | 时旭丹;刘品超 |
| 地址： | 214122 江苏省无锡*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 过敏原 免疫 胶体 层析 试纸 及其 制备 方法 | ||
1.一种检测虾过敏原-虾原肌球蛋白的免疫胶体金层析试纸条，其特征在于由样品垫(3)、胶体金结合垫(4)、硝酸纤维素膜(2)、吸水垫(5)和PVC背衬(1)组成，PVC背衬一端依次粘贴样品垫、胶体金结合垫，中间粘贴硝酸纤维素膜，另一端粘贴吸水垫，胶体金结合垫上包被了抗虾原肌球蛋白的簇特异性抗体-胶体金标记物，硝酸纤维素膜上依次包被有虾原肌球蛋白检测线(6)和羊抗兔IgG控制线(7)。
2.权利要求1所述检测虾过敏原-虾原肌球蛋白的免疫胶体金层析试纸条的制备方法，其特征在于制备步骤为：
(1)提取纯化虾原肌球蛋白：将虾肉匀浆，用pH 7.4、0.01M PBS缓冲溶液浸取24h，用饱和硫酸胺溶液沉淀，4℃、8000g离心15min后收集沉淀溶于pH 7.4、0.01M PBS缓冲溶液中，然后在该PBS缓冲溶液中透析48h脱盐，最后凝胶柱过滤，获得纯化的虾原肌球蛋白；
(2)制备抗虾原肌球蛋白多克隆抗体：以纯化的虾原肌球蛋白为免疫原，免疫制备抗虾原肌球蛋白多克隆抗体；
(3)制备胶体金：用柠檬酸三钠还原剂将氯金酸还原制成20nm-40nm胶体金颗粒；
(4)制备抗虾原肌球蛋白多克隆抗体-胶体金标记物：将3mL胶体金调至pH 9，搅拌下逐滴加入蛋白浓度为0.075mg/mL的抗虾原肌球蛋白多克隆抗体0.2mL，放置30min后加入牛血清白蛋白BSA使终质量浓度为1％，放置至少30min后，10000rpm离心50min，并用重悬液0.002mol/L、pH 9.0的硼酸盐缓冲液3mL重悬两次，最后用0.3mL重悬液重悬，得到抗虾原肌球蛋白多克隆抗体-胶体金标记物；
(5)将抗虾原肌球蛋白多克隆抗体-胶体金标记物包被在胶体金结合垫上，将虾原肌球蛋白、羊抗兔IgG分别包被在硝酸纤维素膜上作为检测线及控制线，在37℃烘箱干燥；
(6)试纸条的组装：将样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫由一端依次粘贴在PVC背衬上，即得到用于检测虾过敏原-虾原肌球蛋白的免疫胶体金层析试纸条。
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