[发明专利]检测动物鼠疫F1抗原的酶联免疫吸附试验夹心法试剂盒

权利要求书

1.一种检测动物鼠疫F1抗原的酶联免疫吸附试验夹心法试剂盒，其特征在于包括酶标记抗体1支，抗体包被板1块，甘油.PB液2ml，10×PBS.T20ml，鼠疫F1抗原阳性对照2ml，阴性对照2ml，抑制用鼠疫F1抗体1支，显色液A液6ml，显色液B液6ml，显色终止液6ml；1％硫柳汞2ml；所述酶标记抗体是冻干的用辣根过氧化物酶标记的鼠疫F1抗体即HRP-F1Ab，所述抗体包被板是用鼠疫F1抗体包被酶标板即F1Ab板。

2.根据权利要求1所述的检测动物鼠疫F1抗原的酶联免疫吸附试验夹心法试剂盒，其特征在于用辣根过氧化物酶标记的鼠疫F1抗体即HRP-F1Ab按下述方法得到：

(1)辣根过氧化物酶的RZ≥3.0即HRP，称取HRP5mg，装入12mm×120mm试管，加入蒸溜水1m1，摇动使HRP溶解；加入新鲜配制的1.3％过碘酸钠水溶液0.5m1，混匀置4-10⁰C30min；加入浓度按容量/容量的1％的乙二醇水溶液0.5m1，室温20-37⁰C放置30min；加入纯化的5mg/ml鼠疫F1抗体溶液1m1,混匀；

(2)把试管内的液体装入透析袋，置4-10⁰C，用0.05mol/LpH9.6碳酸盐缓冲液透析12-16h，将0.5％硼氢化钠溶液0.2m1加入透析袋,混匀，4-10⁰C冰箱中静置2h；

(3)将透析袋移入0.01mol/LpH7.2磷酸盐缓冲液即PBS中透析6-12h，其间换PBS2次；

(4)将透析袋内的液体移入离心管，3000×g离心10min，上清液为辣根过氧化物酶标记鼠疫F1抗体即HRP-F1Ab溶液原液；取上清液，用酶联免疫吸附试验夹心法测定效价应在1：6000以上；用浓度按容量/容量的含50％新生小牛血清PBS稀释，分装，冻干，-20^OC保存；

在上述方法中：溶液浓度除注明外均为重量/容量。

3.根据权利要求1所述的检测动物鼠疫F1抗原的酶联免疫吸附试验夹心法试剂盒，其特征在于鼠疫F1抗体包被板即F1Ab板按下述方法得到：

(1)包被用试剂：包被缓冲液：0.05mol/LpH9.6的碳酸盐缓冲液；

鼠疫F1抗体包被液：包被缓冲液1000m1，加鼠疫F1抗体0.1-0.5mg；

饱和包被液：包被缓冲液1000m1，加牛血清白蛋白0.1g或新生小牛血清20m1；

PBS.T：10×PBS.T用0.9％NaCl液稀释10倍；

(2)鼠疫F1抗体包被酶标板：测定包被液适用鼠疫F1抗体浓度，每管加包被液200微升，28-37^OC湿盒放置4h，4-10^OC放置4-16h；

(3)饱和包被：甩弃酶标板管内的包被液，每管加饱和包被液200微升，28-37^OC湿盒放置3h；甩弃酶标板管内饱和包被液，在吸水纸上拍去管中水珠；

(4)每管加PBS.T200微升浸洗，28-37^OC湿盒放置3h；甩弃PBS.T，流水冲洗5次，在吸水纸上用力拍打酶标板，直到酶标板管内外无可见水珠；

(5)酶标板直立放入37^OC温箱，每30min鼓风或开门通风l次，6-12h干燥后取出，酶标板经上述处理后即为鼠疫F1抗体包被酶标板；

(6)将鼠疫F1抗体板装入塑料袋，封口；4-10^OC干燥保存；

在上述方法中：溶液浓度除注明外均为重量/容量。