[发明专利]一种取代单克隆抗体亲和层析的分离纯化重组人干扰素α1b的方法

权利要求书

1.一种取代单克隆抗体亲和层析的分离纯化重组人干扰素α1b的方法，用于从可溶性表达重组人干扰素α1b的大肠杆菌工程菌中提取重组人干扰素α1b，包括如下步骤：

A.利用高压匀浆机破碎含有重组人干扰素α1b的菌体；

B.将步骤A获得的破碎菌体上样至Streamline扩张床吸附柱，使用NaCl盐梯度洗脱或一步法洗脱得到目标蛋白，优选采用一步法洗脱；

C.将步骤B处理后得到的目标蛋白添加NaCl到2M至2.5M，经疏水柱层析，高盐浓度上样、低盐浓度洗脱；

D.将步骤C处理后得到目标蛋白经阴离子柱层析，利用缓慢的pH梯度将重组人干扰素α1b与其相关蛋白质、异构体分离；

E.采用Sephacryl凝胶过滤层析，去除高分子蛋白，获得重组人干扰素α1b原液。

2.根据权利要求1所述的一种取代单克隆抗体亲和层析的分离纯化重组人干扰素α1b的方法，其特征在于：步骤A的细菌破碎过程是在Tris-EDTA缓冲液中进行，该缓冲液pH为7.0-8.0。

3.根据权利要求2所述的一种取代单克隆抗体亲和层析的分离纯化重组人干扰素α1b的方法，其特征在于：所述Tris-EDTA缓冲液pH值为7.2。

4.根据权利要求1所述的一种取代单克隆抗体亲和层析的分离纯化重组人干扰素α1b的方法，其特征在于：所述步骤B中扩张床吸附采用Streamline DEAE凝胶。

5.根据权利要求1所述的一种取代单克隆抗体亲和层析的分离纯化重组人干扰素α1b的方法，其特征在于：所述步骤B扩张床吸附采用Tris-HCl缓冲液，其pH为7.0-8.0。

6.根据权利要求5所述的一种取代单克隆抗体亲和层析的分离纯化重组人干扰素α1b的方法，其特征在于：所述Tris-HCl缓冲液pH值为7.2。

7.根据权利要求1所述的一种取代单克隆抗体亲和层析的分离纯化重组人干扰素α1b的方法，其特征在于：所述步骤B中使用NaCl盐梯度洗脱采用0.4M的NaCl。

8.根据权利要求1所述的一种取代单克隆抗体亲和层析的分离纯化重组人干扰素α1b的方法，其特征在于：所述步骤B中使用NaCl一步法洗脱采用0.12-0.15M的NaCl。

9.根据权利要求8所述的一种取代单克隆抗体亲和层析的分离纯化重组人干扰素α1b的方法，其特征在于：所述NaCl一步法洗脱采用0.12M的NaCl。

10.根据权利要求1所述的一种取代单克隆抗体亲和层析的分离纯化重组人干扰素α1b的方法，其特征在于：所述步骤C中疏水柱层析采用苯基或丁基作为配基的疏水介质。

11.根据权利要求1所述的一种取代单克隆抗体亲和层析的分离纯化重组人干扰素α1b的方法，其特征在于：所述步骤C中疏水柱层析采用Phenyl Sepharose HP凝胶，平衡液采用pH为6.0的PBS、2.5M的NaCl；洗脱液采用pH为6.0的PBS；采用梯度洗脱方法，梯度程序为0-100％B，15个柱床体积。

12.根据权利要求1所述的一种取代单克隆抗体亲和层析的分离纯化重组人干扰素α1b的方法，其特征在于：所述步骤D中阴离子柱层析采用Q Sepharose离子交换介质。

13.根据权利要求1所述的一种取代单克隆抗体亲和层析的分离纯化重组人干扰素α1b的方法，其特征在于：所述步骤D中阴离子柱层析采用Q Sepharose HP凝胶，平衡液采用pH为5.5的40mM NH₄Ac；洗脱液采用pH为4.0的40mM NH₄Ac；梯度程序为0-100％B，20-30个柱床体积。

14.根据权利要求13所述的一种取代单克隆抗体亲和层析的分离纯化重组人干扰素α1b的方法，其特征在于：所述梯度程序可以是分步梯度程序，为先0-20％B、5min，后20-50％B、20个柱床体积。

15.根据权利要求1所述的一种取代单克隆抗体亲和层析的分离纯化重组人干扰素α1b的方法，其特征在于：所述步骤E中Sephacryl凝胶过滤层析采用Sephacryl S-100凝胶，pH为6.5-8.0的PBS。

16.根据权利要求15所述的一种取代单克隆抗体亲和层析的分离纯化重组人干扰素α1b的方法，其特征在于：所述PBS的pH为7.0。