[发明专利]一种枯草芽孢杆菌及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及一株枯草芽孢杆菌及其用途。 

背景技术

食物是人类生存和社会发展的第一物质基础，而食品(农产品)安全是全世界共同关注的问题，其中，食品防腐保鲜则是食品安全的一个关键。目前普遍使用的化学食品防腐剂潜在的安全隐患不容忽视，但经长期的研究，发现一些合成防腐剂有诱癌性、致畸性和易引起食物中毒等问题。随着社会生活水平的不断提高和消费者对健康的日益关注，人们对防腐剂之类的食品添加剂在安全性能上提出了更高的要求，高效安全的天然食品防腐保鲜剂的开发与应用是食品科学研究的发展趋势。至今，国内外已从动物、植物和微生物等各种生物资源开发溶菌酶、乳酸链球菌素(Nisin)、纳他霉素(Natamycin)、ε-聚赖氨酸、茶多酚、香精油、大蒜素、鱼精蛋白、蜂胶、壳聚糖等一系列可作为天然食品防腐保鲜剂的产品；但由于原料来源、本身的产品性能、制备工艺和价格等多种因素的限制，目前仅乳酸链球菌(Lactococcus lactis)菌株产生的乳酸链球菌素等少数微生物源品种获得了市场的广泛认可，得到了较大规模的使用。乳酸链球菌素是由部分乳酸链球菌菌株产生的细菌素，由34个氨基酸组成，可抑制多种革兰氏阳性细菌的生长繁殖，并对人体安全无毒。但nisin在生产应用中存在其局限性，如它的最适活性pH值为3，在碱性条件下溶解度很少，稳定性也差；食品的化学组成和物理性质也可显著影响Nisin的活性，如新鲜肉中含有的谷胱甘肽能显著降低乳酸链球菌素的活性，而且肉本身较高pH和磷脂等成分也降低了它的抗菌效果；此外，国际上已发现李斯特菌等多种食品腐败革兰氏阳性细菌诱变后可对nisin具有较大的抗性。因此，开发新的高效安全的天然食品防腐保鲜剂是保证食品(农产品)安全的一项重要的任务。 

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种枯草芽孢杆菌，该枯草芽孢杆菌的发酵液具有抗菌功能。 

为了解决上述技术问题，本发明提供一种枯草芽孢杆菌，保藏名称为：Bacillus subtilisZJU15，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉武汉大学；保藏日期：2010年4月2日，保藏号：CCTCC No：M2010074。 

本发明还同时提供了上述枯草芽孢杆菌的用途：用于抑制革兰氏阳性病原细菌、食品污染霉菌或植物病原真菌水稻纹枯病菌。 

本发明以ZJU15菌株(枯草芽孢杆菌CCTCC：M2010074)总DNA为模板，使用通用上游引物(5’-ACGGTTACCTTGTTACGACTT-3’)，通用下游引物(5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’)进行PCR扩增获得1455bp的16s rDNA部分序列(SEQ ID NO：1)。通过Blast与GenBank收录的细菌16s rDNA基因序列比对，发现ZJU15菌株与枯草芽孢杆菌的同源性为99％。用MEGA4.0作进化树(图1)，鉴定菌株(ZJU15)与一株枯草芽孢杆菌(AB301009)的同源性达到100％。 

附图说明

下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。 

图1是本发明的ZJU15的16sDNA构建系统进化树。 

具体实施方式

实施例1、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ZJU15的获得 

2007年6月9日在浙大生物技术研究所采集水稻叶片，用稀释平板法从中分离细菌： 

(1)、制备稀释液：称取水稻叶片10g，放入100ml无菌水中，用高速组织捣碎机捣碎。无菌操作吸取捣碎组织液1.0ml加入9.0ml无菌水中，再用无菌水稀释为10^-1、10^-2，10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7共七个浓度梯度。 

(2)培养：取各浓度的稀释液100ul分别涂布于LB培养基平板(蛋白胨10g/L，NaCl10g/L，酵母浸出物5g/L，琼脂16g/L，其余为水；pH7.0，121℃灭菌20分钟)，凉干后倒置恒温箱内30℃培养。 

(3)取单菌落：等平板上长出菌落后，根据形态挑取单菌落于10ml灭菌的LB液体培养基(蛋白胨10g/L，NaCl 10g/L，酵母浸出物5g/L，其余为水；pH7.0，121℃灭菌20分钟)中，摇床上30℃恒温振荡培养24小时；得细菌培养液。