[发明专利]一种耐低温硝化细菌的筛选方法无效
| 申请号： | 201010202424.8 | 申请日： | 2010-06-18 |
| 公开（公告）号： | CN102286390A | 公开（公告）日： | 2011-12-21 |
| 发明（设计）人： | 赵军;张巍;郎咸明;代秀兰;李晓东;晁雷;匡德舜;张丹 | 申请（专利权）人： | 辽宁北方环境保护有限公司;辽宁省环境科学研究院 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12R1/01 |
| 代理公司： | 沈阳科苑专利商标代理有限公司 21002 | 代理人： | 许宗富;周秀梅 |
| 地址： | 110031 辽宁*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 低温 硝化细菌 筛选 方法 | ||
1.一种耐低温硝化细菌的筛选方法，其特征在于：
1)富集培养：取样品接种于硝化细菌培养基中在，接种量为0.5-1ml，在15-20℃、150-160r/min下恒温振荡培养10-20天，待用；
2)稀释培养：取上述培养的样品在好氧条件下倍比稀释；
3)稀释分离：取上述稀释的各梯度的菌悬液分别培养于硝化细菌培养基中于好氧培养箱中10-15℃恒温培养直至长出菌落；
4)纯化分离：挑取上述稀释分离后的各梯度单菌落于硝化细菌培养基中进行平板划线分离，于10-15℃培养箱中培养7-14d，得到单菌落；所得菌落进行多次平板划线分离，直至获得纯菌落；
5)检测：将上述获得的纯菌落进行性能检测，选取好氧硝化性能优异的菌株，即筛选出好氧硝化细菌菌株；
所述硝化细菌培养基为亚硝酸细菌培养基和硝酸细菌培养基；
亚硝酸细菌培养基成分为：每升培养基是由2.0g(NH4)2SO4、0.25gNaHPO4、0.01g MnSO4.4H2O、0.75g K2HPO4、0.03g MgSO4.7H2O、1.0g CaCO3和蒸馏水组成，pH7.2；硝酸细菌培养基成分为：每升培养基是由1.0g NaNO2、1.0g Na2CO3、0.25g NaH2PO4、1.0g CaCO3、0.75g K2HPO4、0.01g MnSO4、0.03gMgSO4·4H2O和蒸馏水组成，pH7.2。
2.按权利要求1所述耐低温硝化细菌的筛选方法，其特征在于：所述硝化细菌的检测：将筛选出的好氧硝化细菌菌株接种于氨氧化能力鉴定培养液中，于10-15℃条件下培养7-14天，培养期间每隔3天取2ml培养液，再取出的培养液中将格里斯试剂1-2滴直接点滴入，培养液变红即具有硝化活性。
3.按权利要求1所述耐低温硝化细菌的筛选方法，其特征在于：所述格里斯试剂为A液和B液，A液为对氨基苯磺酸0.5g、稀醋酸150mL；B液为α-萘胺0.1g、蒸馏水20mL、稀醋酸150mL。
4.按权利要求1所述耐低温硝化细菌的筛选方法，其特征在于：所述氨氧化能力鉴定培养液为亚硝酸细菌培养基，其成分为：每升培养基是由2.0g(NH4)2SO4、0.25g NaHPO4、0.01g MnSO4.4H2O、0.75g K2HPO4、0.03gMgSO4.7H2O、1.0g CaCO3和蒸馏水组成，pH7.2。
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