[发明专利]东方白鹳的微卫星标记位点引物及遗传学个体识别方法

说明书

技术领域

本发明涉及动物分子遗传学领域，特别涉及东方白鹳的微卫星标记位点引物的开发以及利用微卫星标记位点对东方白鹳进行遗传学个体识别的方法。

背景技术

东方白鹳(Ciconia boyciana)是鹳形目(Ciconiiformes)、鹳科(Ciconiidae)的大型涉禽。东方白鹳在历史上曾广泛分布于东亚的多个国家和地区(Collar et a1.，2001)，上世纪70年代以后由于生境片段化、栖息地丧失、过度捕猎等诸多因素影响，东方白鹳野生种群相继在日本、朝鲜、韩国等地灭绝(王岐山，1995；Murata，2004)。目前东方白鹳的全球野生种群数量仅3000只左右，且呈下降趋势(王岐山，杨兆芬，1995)，对该物种的保护已经刻不容缓。因此在IUCN红色物种名录中，被列入濒危(EN)物种，也是CITES附录I物种。

自20世纪80年代中后期起，多家动物园先后对东方白鹳进行了笼养繁殖，目前中国是东方白鹳人工繁殖数量最多的国家。然而在长期的笼养繁殖过程中常常遇到一些问题，如东方白鹳的谱系混乱，个体之间的亲缘不明等，这也给东方白鹳的人工配对等繁育措施带来困难。对濒危物种的保护不仅要关注栖息地的保护恢复、种群复壮的人工繁育等工作，同时也要重视对其遗传背景的了解(Frankham etal.，2002)，进而制定出科学合理的保育对策。由于缺少高效有力的分子标记，目前对东方白鹳的遗传学的研究还是十分有限，急需从分子遗传学角度对东方白鹳进行保育生物学的研究。其中，通过分子标记来区分个体、实现个体识别，从而为该物种的保育提供技术支撑就变得非常关键。

微卫星(Microsatell ite)是目前在濒危动物保护遗传学研究最理想的一类分子遗传学标记(，1998)，具有多态性高、共显性遗传、遍布整个基因组、选择中性、可扩增、易于检测、重复性好等优势，目前已广泛应用于多种动物的遗传图谱构建、亲子鉴定、个体识别、群体遗传多样性分析等方面研究(Weigend，2001)。但微卫星分子标记具有高度的物种特异性，需要构建微卫星文库以筛选特异的微卫星位点并设计相应的PCR扩增引物。在本申请中，申请人通过构建东方白鹳微卫星文库并对该文库的筛选，获得了东方白鹳特异性的8个微卫星遗传标记，并设计相应的引物，并使用了这些微卫星遗传标记在东方白鹳中实现了分子水平上的个体识别，从而为东方白鹳的谱系分析、婚配计划的制定及遗传背景分析等提供了重要的技术支持。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了东方白鹳的微卫星标记位点引物以及利用微卫星分子标记位点对东方白鹳进行遗传学个体识别的方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明的第一目的是提供东方白鹳的微卫星标记位点引物：

Cbo 102-F：5’-AGCAGCTAAATAACCAG-3’

Cbo 102-R：5’-AGAGATTGTCCCCGAGATAC-3’

Cbo 108-F：5’-CCCAGGTCACAAATTATACG-3’

Cbo 108-R：5’-GAGCCTCACAAAGTTCCCTG-3’

Cbo 109-F：5’-GTGGTGTAGTCCAGTTTATG-3’

Cbo 109-R：5’-ATAACACATGAATGACCTGG-3’

Cbo 121-F：5’-CCACAATGGCAATTTTTCAC-3’

Cbo 121-R：5’-GTTCTCCCAGAGGCTTGCTC-3’

Cbo 133-F：5’-GGACAAAAGGCGATTCTAGC-3’

Cbo 133-R：5’-TTGAGCCAAACATCCGACAC-3’

Cbo 151-F：5’-AATCTGGTCTTGGTCCTTTC-3’

Cbo 151-R：5’-GGTTTTACCCTCTGACACTG-3’

Cbo 168-F：5’-GGGTGCAGTTGAATTAGAC-3’

Cbo 168-R：5’-AATATTTTGGTTTGGTAAAC-3’

Cbo 235-F：5’-TGGCTAAACATCTCCAAAC-3’

Cbo 235-R：5’-TACAAGTAACGCAAGGGTAC-3’。

与所述引物相对应的微卫星位点的指标参数如下表：