[发明专利]含基底膜的人工皮肤构建方法及人工皮肤

权利要求书

1.含基底膜的人工皮肤构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将COL4A1基因转染到成纤维细胞中，制备稳定高表达COL4A1基因的成纤维细胞；

(2)以第(1)步中的稳定高表达COL4A1基因的成纤维细胞为支持细胞，与皮肤角质形成细胞共培养，构建人工皮肤。

2.根据权利要求1所述的含基底膜的人工皮肤构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)构建COL4A1基因载体；

(2)将COL4A1基因载体转染到培养的皮肤成纤维细胞中，筛选出过稳定高表达COL4A1基因的细胞克隆，在37℃、5％CO₂的培养箱中扩增培养，得到稳定高表达COL4A1基因的成纤维细胞；

(3)以第(2)步中获得的稳定高表达COL4A1基因的成纤维细胞为支持细胞，以(2-5)×10⁵个/ml的浓度添加到细胞孔板中，在37℃、5％CO₂的培养箱培养2-5天后，将皮肤角质形成细胞以(3-10)×10⁵/ml的浓度添加到插入式培养皿内，放入细胞孔板中，37℃、5％CO₂的培养箱培养2-7天后，再进行10-20天的气液面培养，构建人工皮肤。

3.根据权利要求2所述的含基底膜的人工皮肤构建方法，其特征在于，所述的COL4A1基因载体选自带有COL4A1基因的质粒、慢病毒、腺病毒或逆转录病毒载体。

4.一种利用权利要求1-3中任一项的方法所构建的人工皮肤。