[发明专利]一种中药活性筛选方法

说明书

技术领域

本发明涉及药物活性筛选和中空纤维微膜技术，具体为一种中药活性筛选方法。

背景技术

中药及天然药物药效物质基础的筛选及评价是中药现代化研究的重要组成部分，人们一直在努力尝试和研究高效、快速、准确的体外中药药物筛选和评价方法。中药化学成分十分复杂，单味药本身就是复杂混合物，而中药传统大多讲究几味甚至几十味药组成的复方用药，再加以提取过程中有些化学成分相互作用，中药有效部位往往含有众多性质相似的化合物。同时中药中各组分间可能存在着药效互补及毒性互消等复杂的相互作用，这不是单一受体模型可以完成的。因此，中药的多成分、多靶点及整体性使中药药效物质基础评价研究进展缓慢。近年来，从药物吸收的角度模拟人体细胞膜进行药物活性成分分析是药效物质基础研究的热点。因为药物在体内的生理过程、药物的活性和毒性等都取决于药物在膜上的分配状况，绝大多数的药物只有进入人体或透过细胞才能表现出活性，发挥作用。因此，化合物在细胞膜上的通透性对激发药物活性至关重要，研究化合物对细胞膜的通透性是筛选和评价药物活性可靠而直接的方法。

目前应用较广泛的生物色谱法（biochromatography）是20世纪末发展起来的，由色谱分离技术与生命科学交叉形成的一种药物活性筛选与评价的色谱技术。它是将生物大分子（酶、受体、载体蛋白）、活性细胞膜（仿生物膜）固定于载体上作为色谱固定相，当中药提取液流经生物膜色谱柱时，由于固定相能够特异性地与中药活性成分结合，使色谱柱选择性地保留活性成分，不同物质与膜作用程度的差别表现出在膜上的不同保留性能，根据这种差别对药物进行生物参数测定、活性筛选和分离分析。以人血清白蛋白和α-酸性糖蛋白作为固定相的生物色谱法对中药当归、川芎、茵陈、黄芪、赤芍、银杏叶、丹参等中的活性成分进行了筛选，测定了活性成分血浆蛋白结合率（毛希琴，邹汉法，罗权舟，孔亮，厉欣，孙乃昌．卵磷脂涂敷生物膜色谱固定相的制备及其稳定性的考察[J]．色谱.2001，19(5)：433~435，孔亮，邹汉法，汪海林，倪坚毅，张玉奎．以人血清白蛋白为固定相的分子生物色谱分析几种中药活性成分的研究[J]．高等学校化学学报.2000，21(1)：36~40）。

生物色谱技术存在以下不足：（1）作为一种离体的活性成分分析手段，而且生物膜与中药提取物作用与色谱过程同时进行，难以同时提供生物体内自然吸收和色谱分离过程所需的条件。（2）生物膜固定相制备和装柱困难，需要特殊的技术和设备，实验的重现性和精密度不能保证。（3）生物色谱使用了具有Si-OH活性中心的硅胶作为生物膜载体的色谱柱，不能排除硅胶活性中心对药物非特异性结合的可能性。

发明内容

本发明的目的是提供一种与现有生物色谱技术操作不同并能克服现有生物色谱技术存在的不足的活性成分筛选方法，以中空纤维生物膜、仿生物膜或生物大分子微萃取为核心的，高效、快速、简便的中药活性成分的筛选方法。

解决以上技术问题，本发明所述的一种中药活性筛选方法，包括以下步骤：

（1）制备中药或中药复方提取液a；（2）在提取液a中加入pH7.4的磷酸盐缓冲溶液，在37℃下恒温并搅拌，得溶液b；（3）将中空纤维管依次用丙酮、甲醇、酸和/或碱、蒸馏水分别超声清洗5~10min，并用蒸馏水反复清洗后，吹干，将生物大分子、仿生物膜或生物膜注入中空纤维管内后，将中空纤维管置于溶液b中进行筛选，（4）筛选结束后收集生物大分子、仿生物膜或生物膜接收相，将与生物大分子、仿生物膜或生物膜特异性结合的中药活性成分游离出来，进行色谱或色谱/质谱分析，从而筛选出能与生物大分子、仿生物膜或生物膜特异性结合的活性成分。