[发明专利]预防不同血清群问号钩端螺旋体感染的通用型三价基因重组疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种疫苗及其制备方法，尤其是用于预防钩端螺旋体病的三价基因重组疫苗及其制备方法。

背景技术

由致病的问号钩端螺旋体(Leptospira interrogans)感染所引起的钩端螺旋体病是全世界流行的自然疫源性人兽共患传染病，尤其好发于水稻种植地区，因而我国是钩端螺旋体病流行的主要疫区之一。

问号钩端螺旋体自然宿主动物众多，感染后无症状或症状轻微，通常不死亡，但可从尿液中排出问号钩端螺旋体，直接污染水源或经土壤污染水源(疫水)。由于问号钩端螺旋体在多种水系中能存活较长时间并可经疫水迅速传播，故钩端螺旋体病是洪涝、地震等自然灾害时重点防疫的传染病之一。我国地域辽阔，自然灾害频繁，因而始终存在着钩端螺旋体病暴发流行的危险。2005年，钩端螺旋体病被列为国家重点监测的13种重大传染病之一，最近又被列入国家计划免疫项目之中。

接种疫苗是预防和控制钩端螺旋体病最为经济和有效的措施。目前国际上有两种钩端螺旋体疫苗产品：多价全菌死疫苗和多价外膜疫苗，目前以前者应用为主。然而，上述疫苗在预防钩端螺旋体病中存在的问题是：①问号钩端螺旋体血清群众多，不同地区流行的钩端螺旋体血清群可有差别，多价全菌死疫苗或多价外膜疫苗对疫苗中不包含的问号钩端螺旋体血清群感染仅有微弱保护力甚至无保护力；②钩端螺旋体病病人主要是农民，由于多价钩端螺旋体全菌死疫苗、多价钩端螺旋体外膜疫苗均含脂多糖内毒素，故副作用很大，接种者数日内不能进行体力劳动，严重影响了免疫接种的积极性。因此，研制对不同血清群钩端螺旋体有广泛交叉保护作用通用型疫苗，对于钩端螺旋体病预防和控制具有极为重要的意义并有广阔的应用前景。

基因工程疫苗以人工重组表达的蛋白分子为抗原，免疫成分明确，无明显的毒副作用，因而是当今新型疫苗研制的主要方向。病毒的抗原构造十分简单，其基因工程疫苗的免疫保护效果较好，如乙型肝炎病毒的重组表面抗原疫苗。但细菌的抗原构造复杂，单一抗原的基因工程疫苗往往免疫保护效果不佳，这是目前尚无细菌单一抗原基因工程疫苗产品的主要原因，采用多抗原是提高基因工程疫苗免疫保护效果的有效途径之一。

属特异性抗原是所有钩端螺旋体血清群均含有的一类抗原。我们发现，外膜脂蛋白LipL32和LipL21及穿膜蛋白OmpL1是我国15群15型钩端螺旋体参考标准株、钩端螺旋体分离株均表达的外膜蛋白抗原，其中LipL21编码基因只有一个基因型，OmpL1和LipL32编码基因分别有3个(ompL1/1、ompL1/2和ompL1/3)和2个基因型(lipL32/1和lipL32/2)，但各基因型表达产物抗血清对我国15群15型问号钩端螺旋体参考标准株均有不同程度的交叉凝集，表明OmpL1和LipL32也是属特异性表面蛋白抗原。黄疸出血群是我国主要流行的问号钩端螺旋体血清群，70％钩端螺旋体病例均为感染问号钩端螺旋体黄疸出血群所致，其余30％钩端螺旋体病例为感染问号钩端螺旋体流感伤寒群、秋季群、波摩那群、澳洲群、犬群、七日热群等所致。上述问号钩端螺旋体各血清群lipL32基因型均为lipL32/1型，问号钩端螺旋体黄疸出血群、波摩那群、澳洲群、犬群、七日热群ompL1基因型为ompL1/2型，流感伤寒群、秋季群为ompL1/1型。因此，我们采用黄疸出血群赖型赖株LipL32/1、LipL21和OmpL1/2作为问号钩端螺旋体通用性三价基因重组新疫苗的抗原。

发明内容

本发明的目的是要填补现有问号钩端螺旋体多价全菌死疫苗和多价外膜疫苗的缺陷，提供一种能有效预防不同血清群问号钩端螺旋体感染且制造成本较低的通用型三价基因重组疫苗及其制备方法。