[发明专利]一种重金属铜人工抗原的合成方法无效
| 申请号： | 201010208285.X | 申请日： | 2010-06-18 |
| 公开（公告）号： | CN102219852A | 公开（公告）日： | 2011-10-19 |
| 发明（设计）人： | 胥传来;陈莲君;邓小芳;马文蔚;严文静;勇倩倩 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C07K14/765 | 分类号： | C07K14/765;C07K1/113 |
| 代理公司： | 无锡市大为专利商标事务所 32104 | 代理人： | 时旭丹;刘品超 |
| 地址： | 214122 江苏省无锡*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重金属 人工 抗原 合成 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种重金属铜人工抗原的合成方法，其特征在于以二乙烯三胺五乙酸DTPA为螯合剂，将铜离子与载体蛋白牛血清白蛋白BSA偶联；
(1)重金属铜人工抗原的合成：
称取0.147g的氯化铜溶于1mL浓硝酸中制备成铜离子溶液；
称取6mg的DTPA至1.5mL离心管中，先加入10μL的10mol/L的KOH溶液，再加入990μL的p H 9.7、0.1mol/L的羟乙基哌嗪乙硫磺酸HEPES溶液，溶解后即制备成DTPA螯合剂溶液；
称取0.25g牛血清白蛋白BSA溶于5mL、0.1mol/L、pH值为7.4的HEPES溶液中制备成50mg/mL的BSA溶液；
先往反应器中加入520μL的DTPA螯合剂溶液，再加入12μL的铜离子溶液，在室温下在磁力搅拌器上反应1h以上，形成半抗原反应液；
往半抗原反应液中几乎同时加入500μL的BSA溶液和200μL的0.1mol/L、pH值为9.7的HEPES溶液，调节pH值至9.0；反应过夜后用Centricon-30超滤离心管对蛋白质复合物进行分离纯化，即得重金属铜人工抗原；
(2)重金属铜人工抗原的鉴定：重金属铜人工抗原采用凝胶电泳法鉴定其偶联结果，利用标准蛋白得到标准曲线，计算其偶联比。
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