[发明专利]猪干扰素基因家族及其作为抗猪蓝耳病药物及疫苗佐剂的应用

权利要求书

1.从家猪基因组中分离到的干扰素基因家族，其特征在于所述家猪干扰素基因编码的氨基酸序列为SEQ ID NO.1，SEQ ID NO.3，SEQ ID NO.5，SEQ ID NO.7，或SEQ IDNO.9；其核苷酸序列为SEQ ID NO.2，SEQ ID NO.4，SEQ ID NO.6，SEQ ID NO.8，SEQ IDNO.10。

2.一种如权利要求1所述的从家猪基因组中分离到的干扰素基因家族作为抗猪病毒药物和佐剂抗病毒药物和佐剂的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述猪病毒为猪蓝耳病病毒，猪口蹄疫病毒，猪流感病毒，或猪圆环病毒。

4.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于将所述干扰素基因家族中的一种或任意几种，利用分子生物学技术克隆入真核表达载体，获得重组质粒；所述真核表达载体是具有真核启动子，原核复制子或原核抗性基因为特征的任一种DNA表达载体。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于由所述的重组质粒单独使用，或由任一具辅助质粒进入真核细胞作用的试剂配合使用，促使质粒进入动物体。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于由所述的重组质转入猪霍乱沙门氏菌弱毒株或其他沙门氏菌弱毒株，或将所述家猪干扰素基因与任一病毒载体相连，获得的活菌苗或活疫苗。

7.一种抗猪病毒药物或佐剂，其特征在于是将家猪干扰素基因利用分子生物学技术克隆入真核表达载体获得的重组质粒，其中家猪干扰素基因是指编码的氨基酸序列为SEQID NO.1，SEQ ID NO.3，SEQ ID NO.5，SEQ ID NO.7，或SEQ ID NO.9；其对应的核苷酸序列为SEQ ID NO.2，SEQ ID NO.4，SEQ ID NO.6，SEQ ID NO.8，SEQ ID NO.10，所述真核表达载体是具有真核启动子，原核复制子或原核抗性基因为特征的任一种DNA表达载体。

8.根据权利要求7所述的抗猪病毒药物或佐剂，其特征在于所述猪病毒为猪蓝耳病病毒，猪口蹄疫病毒，猪流感病毒，或猪圆环病毒。

9.一种如权利要求7所述的抗猪病毒药物或佐剂的制备方法，包括基因制备、重组、蛋白活性测定及表达载体质粒的大规模抽提，其特征在于具体步骤如下：

(1)通过PCR的方法从家猪家猪肝脏基因组DNA中得到家猪新型干扰素完整基因；

(2)将上述基因插入原核克隆载体，并转化大肠杆菌，测序后确定获得了正确的基因；

(3)将上述基因插入真核表达载体获得重组质粒，并转化大肠杆菌，抽提质粒转染MARK-145细胞，用猪蓝耳病病攻击已转染的细胞，观察保护情况，确定构建的重组质粒可以表达活性的家猪新型干扰素蛋白；

(4)阳性菌株在37℃发酵培养10-15小时，收集菌体；破碎菌体并大规模制备重组质粒，与质粒携带剂混合溶于生理盐水，稀释至合适浓度，即配制得基因工程药物和疫苗佐剂；

或者将步骤(3)中所得的真核表达载体转化入猪霍乱沙门氏菌弱毒株，阳性菌株在37℃发酵培养10-15小时，收集菌体，利用生理盐水稀释质粒到合适的浓度，即配制得基因工程药物和灭活疫苗佐剂。

10.如权利要求7所述的抗猪病毒药物或佐剂的应用，其特征在于是该药物单独作用，以任一携带方式进入动物体内作用，或与任意蓝耳病疫苗或任意其他药物联合作用，用于预防和治疗猪蓝耳病。