[发明专利]甘氨酸的测定方法与甘氨酸测定试剂盒

权利要求书

1.一种利用二倍扩增法、酶比色法及酶联法技术的甘氨酸浓度测定方法，其测定的技术原理是根据下述氰化氢合成酶、甲基丁烯酰辅酶A羧化酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶的系列催化反应完成：

甘氨酸+2辅酶氰化氢合成酶氰化氢+二氢化碳+2还原型辅酶

二氧化碳+腺苷三磷酸+3-甲基丁烯酸酰辅酶A甲基丁烯酰辅酶A羧化酶

                      腺苷二磷酸+磷酸根+3-甲基戊烯二酰辅酶A

磷酸根+甘油醛-3-磷酸+辅酶甘油醛-3-磷酸脱氢酶

                                甘油酸-1，3-双磷酸+还原型辅酶。

2.一种甘氨酸的测定方法，其特征在于该方法的步骤如下：

2.1样品准备：

2.1.1标准样品的制备

将一定量的甘氨酸溶于水或缓冲液中，再将其浓度调整到1毫摩尔/升；

2.1.2待测样品的制备

待测液体样品直接测试，无须预处理；将一定量的待测固体样品像制备标准样品一样溶于水或缓冲液中；

2.1.3空白样品

所述的水或缓冲液作为空白样品，其甘氨酸浓度为0毫摩尔/升；

2.2试剂溶液的制备：

分别移取或称取缓冲液、稳定剂、辅酶、氰化氢合成酶、甲基丁烯酰辅酶A羧化酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、腺苷三磷酸、3-甲基丁烯酸酰辅酶A与甘油醛-3-磷酸，然后将它们混合均匀，用水溶解得到所述的试剂溶液，它们的浓度分别是20-500mmol/L、0.001-7mol/L、0.1-5mmol/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、1-100mmol/L、1-100mmol/L与1-100mmol/L；

2.3待测样品与在步骤2.2)得到的试剂溶液按照体积比1/10至1/500进行混合，在温度15-45℃下反应5-60分钟，在主波长340nm与副波长405nm(如果受 仪器限制，可以不设副波长)下进行测定，测定其吸光度随时间的变化；

2.4在与步骤2.3)同样的条件下测定步骤2.1.1)标准样品的吸光度随时间的变化；

2.5在与步骤2.3)同样的条件下测定在步骤2.1.3)使用的水或缓冲液作为空白溶液的吸光度随时间的变化；

2.6数据处理

由步骤2.3-2.5)所述测定的主波长340nm的吸光度随时间的变化，根据下式计算得到甘氨酸的含量：

式中：

ΔA(样品)表示步骤2.3)得到的待测样品的吸光度变化；

ΔA(空白)表示步骤2.5)得到的空白溶液的吸光度变化；

ΔA(标准)表示步骤2.4)标准样品的吸光度变化。

3.根据权利要求1、2所述的测定方法，其特征在于使用全自动生化分析仪测定时，待测样品、所述标准样品与所述空白样品由该分析仪在设定条件下自动取样，然后在下述条件下进行测定：测定方法为终点法，温度37℃，反应时间10分钟，测试主波长340nm，测试副波长405nm，被测甘氨酸样品与试剂的体积比例为1/10-1/500，反应方向为正反应，延迟时间1/0分钟，检测时间4/5分钟。

4.根据权利要求1、2或3所述的测定方法，其特征在于，所述的稳定剂是一种或多种选自硫酸铵、氯化钠、乙二醇、丙二醇、甘油或双乙酸钠、叠氮钠等防腐剂的稳定剂；所述的缓冲液是一种或多种选自三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、咪唑-盐酸缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、硼砂-盐酸缓冲液、巴比妥钠-盐酸缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液、二乙醇胺缓冲液或“PBS”缓冲液的缓冲液；所述的辅酶是一种或多种选自NADP⁺、NAD⁺或thio-NAD⁺的辅酶。