[发明专利]一种猪瘟活疫苗效力检验方法有效
| 申请号： | 201010210087.7 | 申请日： | 2010-06-22 |
| 公开（公告）号： | CN101846683A | 公开（公告）日： | 2010-09-29 |
| 发明（设计）人： | 张许科;孙进忠;乔荣岑 | 申请（专利权）人： | 洛阳普莱柯生物工程有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/569 | 分类号： | G01N33/569;G01N21/64;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 北京华夏正合知识产权代理事务所(普通合伙) 11017 | 代理人： | 韩登营 |
| 地址： | 471000 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 猪瘟 疫苗 效力 检验 方法 | ||
1.一种猪瘟活疫苗效力检验方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)准备传代细胞
将长满单层的细胞，用EDTA-胰酶消化分散，得到传代细胞悬液；
(2)猪瘟活疫苗在传代细胞中的病毒含量测定
用细胞维持液将冻干猪瘟活疫苗回溶并稀释，将活疫苗稀释液与步骤(1)中细胞悬液加入细胞培养板中，置于培养箱中培养，同时设立不接毒正常细胞对照；
(3)间接免疫荧光(IFA)方法检测步骤(2)所得细胞中病毒含量
①将细胞培养板从培养箱中取出，弃去培养板孔内液体，用PBS洗涤；
②加入丙酮水溶液固定；
③弃去丙酮水溶液，用PBS洗涤；
④加入PBS稀释的猪瘟阳性血清(一抗)；
⑤弃去一抗，PBS洗涤；
⑥加入PBS稀释的FITC标记兔抗猪IgG(二抗)；
⑦弃去二抗，用PBS洗涤，最后加入PBS保存；
⑧置于荧光显微镜下观察荧光情况，判定猪瘟活疫苗效力。
2.根据权利要求1所述的猪瘟活疫苗效力检验方法，其特征在于：步骤(1)中在细胞板中加入细胞悬液的同时，加入步骤(2)中经稀释的猪瘟疫苗液。
3.根据权利要求1所述的猪瘟活疫苗效力检验方法，其特征在于：步骤(2)中所述猪瘟活疫苗稀释是在0-8℃低温环境下进行的。
4.根据权利要求1所述的猪瘟活疫苗效力检验方法，其特征在于：步骤(2)中培养箱是CO2培养箱，温度为36-37℃，CO2含量为2.5％-5％，培养时间为2-5天。
5.根据权利要求1所述的猪瘟活疫苗效力检验方法，其特征在于：步骤(3)中PBS洗涤的次数为2-7次。
6.根据权利要求1所述的猪瘟活疫苗效力检验方法，其特征在于：步骤(3)中丙酮水溶液温度为0-8℃，浓度为30％-90％。
7.根据权利要求1所述的猪瘟活疫苗效力检验方法，其特征在于：步骤(3)中一抗的稀释倍数选择范围为50-1000倍，二抗的稀释倍数选择范围为50-10000倍。
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