[发明专利]胰高血糖素受体基因的RNA干扰序列

说明书

本发明专利申请为中国发明专利申请号200910053750.4，申请日2009年6月25日，申请人“上海交通大学”，发明名称“胰高血糖素受体基因的RNA干扰序列”的分案申请

技术领域

本发明涉及的是一种基因技术领域的RNA干扰序列，具体涉及一种胰高血糖素受体(GCGR)基因的RNA干扰序列。

背景技术

RNA干扰(RNA interference，RNAi)是生物体内抑制特定基因表达的一种现象，它是指当细胞内存在与内源性mRNA编码区同源的双链RNA时，该mRNA发生降解而导致基因表达沉默的现象，这种现象发生在转录后水平，又称为转录后基因沉默。RNA干扰作用是通过一类较稳定的中间介质实现的。对植物的研究证明，双链RNA复合体先降解成为35nt左右的小RNA分子，然后他们通过序列互补与mRNA结合，从而导致mRNA降解。对果蝇的研究证明，长度为21～23nt的小RNA分子是引起RNA干扰现象的直接原因，这种小RNA分子被称之为小干扰RNA(smallinterfering RNA，siRNA)。小干扰RNA被认为是一种快捷、高效的调控体内基因表达的方法，因而在基因治疗方面具有极大的应用前景。

临床研究认为，对于胰岛素抵抗为主，或胰岛素分泌不足为主伴所致的II型糖尿病病症，可以通过调节胰高血糖素的作用来达到稳定患者体内血糖水平的目的。一方面，胰高血糖素具有强烈的促进糖异生和糖原分解的作用，因此可以通过抑制胰高血糖素的升高血糖作用来缓解症状；另一方面，对胰高血糖素激素的调节将会间接的影响到胰岛素分泌情况，达到缓解症状的目的。胰高血糖素受体分子GCGR是具有七次穿细胞膜结构的G蛋白偶联受体家族，主要分布于肝脏，肾脏，胰腺等器官。其中，肝脏器官分布的胰高血糖素受体与胰高血糖素之间的互相作用对于血糖调节具有重要的意义。R.W.Gelling等发现GCGR的基因敲除小鼠模型中血糖浓度明显降低，并且小鼠的糖耐量得到了很好的提高。近年来小分子药物胰高血糖素受体(GCGR)拮抗剂被报道在糖尿病小鼠模型中等也有很好的降糖稳定作用。而且GCGR的反义抑制核苷酸也被证实能够有效的改善糖尿病小鼠模型中的高血糖。这些研究揭示了肝脏GCGR基因是一个主要的糖尿病治疗药物靶点，抑制肝脏GCGR受体的作用可以缓解血糖升高的症状，治疗糖尿病。

经对现有技术的文献检索发现，尚无胰高血糖素受体基因的RNA干扰序列的有关报道。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种胰高血糖素受体基因的RNA干扰序列。本发明的RNA干扰序列可有效的降低糖尿病模型小鼠的血糖浓度。

本发明是通过以下的技术方案实现的：

本发明涉及的第一种胰高血糖素受体基因的RNA干扰序列，该序列为双链RNA分子，该RNA分子的正义链具有SEQ ID NO：1所示的序列，反义链具有SEQ ID NO：2所示的序列。

本发明涉及的第二种胰高血糖素受体基因的RNA干扰序列，该序列为双链RNA分子，该RNA分子的正义链具有SEQ ID NO：3所示的序列，反义链具有SEQ ID NO：4所示的序列。

本发明涉及的第三种胰高血糖素受体基因的RNA干扰序列，该序列为双链RNA分子，该RNA分子的正义链具有SEQ ID NO：5所示的序列，反义链具有SEQ ID NO：6所示的序列。

本发明具有如下的有益效果：本发明的干扰RNA序列较为有效的降低糖尿病模型小鼠的血糖浓度，通过对血糖-浓度曲线下面积AUC的分析，给药后的模型小鼠在葡萄糖利用能力方面得到了较大的提高。

附图说明

图1为给药后糖尿病小鼠模型糖耐量测试血糖浓度-时间曲线示意图；

图2为不同siRNA组给药后糖尿病小鼠模型血糖含量变化示意图。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等分子克隆：实验室手册(New York：Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例

试剂：四氧嘧啶Alloxan monohydrate(HPLC纯试剂，购自美国sigma公司，产品编号A7413)；

葡萄糖测定试剂盒——葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法(购自上海荣盛生物技术有限公司，产品编号361510，批号20030101)；