[发明专利]一种短小芽孢杆菌及其在毒杀松材线虫中的应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物农药技术领域，尤其涉及一种短小芽孢杆菌及其在毒杀松材线虫中的应用。

背景技术

当前，疫情扩散蔓延的形势仍然十分严峻。松材线虫病不仅影响林业生产，而且给园林绿化、旅游事业及人民群众生活等方面带来不可估量的损失，防治该病害成为当前国内外研究的热点和难点。

目前，对松材线虫病的防治多采用化学防治，但化学药剂因存在毒性大、对环境污染等问题在应用中逐渐受到限制。例如曾广泛应用的化学杀线剂丰索磷、灭线磷等因为致畸、致癌以及引起精子减少等原因而被禁用，胺线磷、丁环硫磷等已停止开发。现有的大多数化学药剂品种也存在着成本高、防效不理想、产生药害和抗药性等问题，使松材线虫的防治工作面临很大的困境。为此，许多国家的科学家都在努力寻找防治植物线虫的新途径。开发高效低毒杀线剂和生物杀线剂已经迫在眉睫。目前，利用资源丰富的有益微生物防治植物线虫成为了发展生物杀线剂的重要途径。

芽孢杆菌在自然界分布非常广泛，生理特性丰富多样，是土壤和植物微生态优势种群之一。它们可以产生丰富的具有潜在植物病害防治和医学应用价值的抗菌物质，是植物病害生防微生物的重要组成部分(Tamenhiro，2002；蒙显英，2004)。芽孢杆菌内生芽孢，繁殖能力强，有利于工业生产，是自然界中广泛存在的非致病细菌，对人无害，不污染环境。目前，已经报道的对植物线虫有防治作用的芽孢杆菌有4个种，杀线虫芽孢杆菌(Bacillus nematocida)、侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporas)、坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)和苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)(Huang等，2005；Smirnova等，1997；We等，2003)。Mari等(1996)研究发现短小芽孢杆菌(B.pumilus)对某些真菌具有拮抗作用，是一种有开发前途的生防菌。目前国外主要将短小芽孢杆菌应用于防治蔬菜的根部病害，Akhtar等(2008)报道短小芽孢杆菌用于防治鹰嘴豆根腐病有很好的效果；近年来，我国也有用短小芽孢杆菌防治番茄灰霉病、黄瓜菌核病菌等植物病害的报道(李桂霞等，2009；于婷等，2009)。目前，国内外未见短小芽孢杆菌在防治植物线虫方面的报道。本发明通过研究测定短小芽孢杆菌无菌发酵滤液的杀线活性、高效产杀线物质发酵条件的筛选，以期制备出高效的杀线剂，这对植物线虫病害的生物防治具有重要的理论指导意义和实践应用价值。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种高效毒杀松材线虫的短小芽孢杆菌。

本发明还要解决的一个技术问题是提供上述短小芽孢杆菌的用途。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

高效防治植物线虫的短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)JK-SD001，是一种从杨树干部分离筛选获得的对松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)具有毒杀作用的细菌菌株，已保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏号M 209095。

短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)JK-SD001在牛肉膏蛋白胨培养基平板上菌落较大，淡黄色，直径一般5～6mm，圆形，边缘整齐，中间有褶皱，光滑湿润，菌体直杆状，大小为1×(1.5～2.3)μm，周生鞭毛，芽孢椭圆形，中生。革兰氏染色表现为阳性；淀粉水解阴性；好氧；氧化酶反应为阴性；过氧化氢酶反应阳性。测得16SrDNA大部分序列1443bp，具体如SEQ ID No：1所示。16SrDNA基因序列已提交GenBank，登记号GQ169781。将所测16SrDNA序列通过BLAST比对，能在GenBank中找到同源性非常高的相近菌株序列。与JK-SD001菌株相似性最高的是Bacillus pumilus，同源性达到99％。构建进化树发现，JK-SD001与Bacillus pumilus同属一个遗传分枝，亲缘关系十分接近。