[发明专利]一种肉苁蓉多糖的分离提纯方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种肉苁蓉多糖的分离提纯方法，尤其是以微波辅助冻融法提取和大孔吸附树脂纯化为主要手段的提取分离方法。属于生物化工技术领域。

背景技术

肉苁蓉为列当科多年生寄生植物，主要分布于内蒙古、宁夏、甘肃、新疆、青海等沙漠、荒漠干旱地带，具有极高的药用价值，有“沙漠人参”之美誉，是我国传统的名贵中药材。肉苁蓉中含有丰富的肉苁蓉多糖、苯乙醇苷、生物碱、有机酸等，此外，还含有大量的矿物元素。肉苁蓉有补肾助阳，润肠通便之功效；用于治疗肾阳亏虚，精血不足之阳痿早泄、宫冷不孕、腰膝酸痛、疲软无力，以及肠燥津枯之便秘等症。《本草求真》中记有：“肉苁蓉，诸书既言峻补精血，又言力能兴阳助火，是明因其气温，力专滋阴，得此阳随阴附，而阳自见兴耳。惟其力能滋补，故凡症瘕积块，得此而坚即消。惟其滋补而阳得助，故凡遗精茎痛，寒热时作，亦得因是而除。”近代药理学研究表明，肉苁蓉多糖能提高机体免疫功能，促进DNA合成，增强体力，提高智力，具有明显的抗衰老作用。

文献中对肉苁蓉多糖提取纯化已有一些报道。2009年11月10日，王晓琴等在“安徽农业科学”上发表了题为“肉苁蓉多糖提取工艺及抑菌作用研究”的文章，提出采用热水浸提法提取肉苁蓉多糖的方法，最佳提取工艺为以1∶15的料水比在85℃下浸提2h。2006年2月28日，吴波等在“广州医学院学报”上发表了题为“肉苁蓉水溶性多糖的分离纯化及分析”的文章，提出采用95％乙醇脱脂、水提醇沉得粗多糖，Sephadex柱层析精制多糖。2002年12月25日，曾群力等在“中草药”上发表了题为“肉苁蓉多糖的分离、纯化和鉴定”的文章，提出经脱脂、沸水抽提、乙醇沉淀、Sevag法脱蛋白得到的粗多糖，再经离子交换层析和凝胶柱层析得到纯净的肉苁蓉多糖。2002年4月30日，孙萍等在“数理医药学杂志”上发表了题为“肉苁蓉多糖的微波提取及含量测定”的文章，提出用水提醇沉法提取肉苁蓉多糖。

发明内容

本发明的目的是提供一种以微波辅助冻融法为主要提取手段和以大孔树脂吸附为主要纯化技术的肉苁蓉多糖的提取分离新方法，以达到工艺简单、提取效率高的目的。

微波提取的原理是微射线辐射于溶剂并透过细胞壁到达细胞内部，由于溶剂及细胞液吸收微波能，细胞内部温度升高，压力增大，当压力超过细胞壁的承受能力时，细胞壁破裂，细胞内部的有效成份从细胞中释放出来，传递转移到溶剂周围被溶剂溶解。微波具有穿透力强、选择性高、加热效率高等特点。微波提取法具有提取时间短，提取率高，是强化固液提取过程颇具发展潜力的新型辅助提取技术。

冻融法是将目标物冷冻至-15℃到-20℃，然后放置于室温(或40℃)融化，由于细胞中形成了冰晶及剩余液体中盐浓度的增高可以使细胞破裂。

微波辅助冻融法提取肉苁蓉多糖，由于微波加热的特殊方式，使细胞内水分子吸收微波能后温度迅速上升并汽化，产生的压力使细胞壁破碎，再加上微波加热前的冰冻处理，进一步促进了细胞壁的破碎效果，使肉苁蓉多糖更易倾出，大大提高了肉苁蓉多糖的提取效率。

大孔吸附树脂是一类不含交换基团且有大孔结构的高分子吸附树脂，具有良好的大孔网状结构和较大的比表面积，在树脂内部具有三维空间立体孔结构，可以通过物理吸附从水溶液中有选择地吸附有机物，具有物理化学稳定性高、比表面积大、吸附容量大、选择性好、吸附速度快、解吸条件温和、再生处理方便、使用周期长、宜于构成闭路循环、节省费用等诸多优点。多数大孔吸附树脂对多糖的吸附能力很差，而对色素和蛋白质等物质的吸附能力较强，据此可有效去除水溶性色素和蛋白质等物质，以纯化肉苁蓉多糖。

本发明所述肉苁蓉多糖分离提纯方法的具体步骤包括：

(1)提取：将肉苁蓉洗净烘干后粉碎，分别用2-5倍重量的石油醚和体积分数95％的乙醇浸泡并超声处理20至60分钟，过滤后挥干溶剂，残渣用1-2倍重量的新煮沸并放凉的蒸馏水浸泡并置于冰箱中(-15℃至-25℃)冷冻8-12小时，取出后置于微波炉中800瓦处理20-40分钟(每隔5分钟停止一次，6-10分钟/次)后，过滤，残渣再用1-2倍重量的新煮沸并放凉的蒸馏水浸泡，重复冷冻和微波处理过程2-5次，合并滤液即为多糖提取液；