[发明专利]超敏C反应蛋白检测方法及超敏C反应蛋白检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于医学免疫领域，涉及C反应蛋白检测方法，还涉及超敏C反应蛋白检测试剂盒。

背景技术

C反应蛋白(C-reactive protein，CRP)，1930年Tillet和Francis在急性大叶性肺炎患者血清中发现能在钙离子存在时与肺炎球菌C多糖起沉淀反应而得名，是人类重要的急性期反应蛋白，急性期浓度可升高上千倍。人类C反应蛋白是由肝脏产生，由五个相同的亚基以非共价键形成环状五聚体。

C反应蛋白目前已经作为医院常规检测项目，可以在很多疾病诊断上作为辅助判断依据。C反应蛋白在炎症开始6-12小时浓度增高，24-48小时即可达到峰值，随着疾病的好转其浓度可迅速恢复至正常水平，因此可用于监测病情、评估抗生素疗效等方面。临床上采用普通C反应蛋白检测试剂盒对C反应蛋白进行检测，虽可以使用全血作为检测样本，但检测范围一股在3-200mg/L左右，最低检测限一股在3-5mg/L左右，灵敏度较低。

在儿科感染性疾病中，由于新生儿的C反应蛋白水平通常很低，用常规C反应蛋白的检测反应不出微小的变化；在心血管疾病诊断方面，CRP＜1mg/L为低危险性，1-3mg/L为中度危险性，＞3mg/L为高危险性；因此普通C反应蛋白检测试剂盒无法用于新生儿感染性疾病及心脑血管疾病方面的诊断和预测。

近年来，随着检测技术的进步，C反应蛋白检测技术也得到了提高，于是出现了超敏C反应蛋白这一概念。超敏C反应蛋白检测方法具有很好的灵敏度，能检测出较低的C反应蛋白含量，因此能用于新生儿感染性疾病及心脑血管疾病方面的诊断和预测，同时在冠心病、中风、周围血管栓塞等疾病诊断和预测中发挥着重要的作用，甚至被认为是心血管疾病危险评估的“金标准”。部分学者认为超敏C反应蛋白可以作为心血管疾病(例如：心肌梗塞)危险评估的一项独立指标。

首先，目前超敏C反应蛋白检测试剂盒都是采用血清或血浆样本进行检测，需要静脉取血且采血量大，样本使用前还需离心，无法直接采用手指微量全血作为检测样本，检测速度慢，因此不能很好的满足医院急诊和门诊快速诊断的要求，需要改进；再者，感染性疾病时机体产生的炎症反应使得C反应蛋白浓度大大的升高，严重时可达200mg/L或更高，此时如果使用最高检测限一股在15-20mg/L左右的超敏C反应蛋白检测试剂盒检测，则需要事先对样本进行一系列稀释，即浪费试剂，又操作繁琐；现有超敏C反应蛋白检测试剂盒检测范围小，不适用于感染性疾病的检测，需要改进。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测速度快、检测范围宽的超敏C反应蛋白检测方法，本发明的另一目的是提供一种可以直接使用全血作为样本、检测速度快、检测范围宽的超敏C反应蛋白检测试剂盒。

超敏C反应蛋白检测方法，包括如下步骤：

a、建立散射值与多个C反应蛋白标准品的散射值-浓度对应数据库：将多个已知不同浓度的C反应蛋白标准品分别与处理缓冲液R1试剂混匀制得抗原标准液，然后将乳胶抗体R2试剂加入抗原标准液、同时用特定蛋白分析仪测定标准品散色值，从而建立散射值-浓度对应数据库；

b、测定待检样品的散色值：将待检样品与处理缓冲液R1试剂混匀制得抗原液，然后将乳胶抗体R2试剂加入抗原液、同时用特定蛋白分析仪测定待检样品的散色值；

c、查询C反应蛋白浓度：将b步骤测定的散色值与散射值-浓度对应数据库对照，查询得知C反应蛋白浓度；

其中，乳胶抗体R2试剂中包括兔抗人C反应蛋白抗体或羊抗人C反应蛋白抗体致敏的苯乙烯乳胶。

进一步的，所述处理缓冲液R1试剂包括如下组分：0.005％～0.05％的十二烷基硫酸钠(SDS)、0.225％～0.9％的NaCl、0.078％～0.312％的NaH₂PO₄.2H₂O、0.715％～2.86％的Na₂HPO₄.12H₂O、0.09％～0.1％的叠氮钠。处理缓冲液中的十二烷基硫酸钠成份属于阴离子表面活性剂，浓度使用过高会抑制抗原抗体的凝集反应，有文献报导使用0.5％浓度的十二烷基硫酸钠溶血，溶血效果好但会抑制接下来的抗原抗体反应，本发明采用的浓度范围，即可以达到快速溶血的目的，又不会抑制抗原抗体反应。

进一步的，所述乳胶抗体R2试剂包括如下组分：0.1％～0.5％兔抗人C反应蛋白抗体或羊抗人C反应蛋白抗体致敏的苯乙烯乳胶、0.2％～0.8％的甘氨酸、0.09％～0.1％的叠氮钠。