[发明专利]一种青花菜Ogu胞质快速鉴定试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种青花菜Ogu胞质快速鉴定试剂盒，其特征在于包括以下试剂：

试剂A，包括有特异引物、PCR缓冲液、Taq聚合酶、dNTP以及Oligo-dT特异引物；

试剂B，标准DL-2000ladder。

2.根据权利要求1所述的青花菜Ogu胞质快速鉴定试剂盒，其特征在于：所述的oligo-dT特异引物包括有上游引物Ogu-A和下游引物Ogu-B，其中

Ogu-A序列为5’-TTGTCCACTTTTTGTCATAATCTCA-3’，

Ogu-B序列为5’-TTTCTCGGTCCATTTTCCAC-3。

3.根据权利要求1或2所述的青花菜Ogu胞质快速鉴定试剂盒，其特征在于：所述试剂A各组分配比为：

成分                 试剂浓度

特异引物             0.4mM/个

PCR缓冲液            10mM Tris-HCl，50Mm KCl，1.5mM MgCl₂

Taq聚合酶            0.04U/μL

dNTP                 0.2mM。

4.一种青花菜Ogu胞质快速鉴定试剂盒的检测方法，其特征在于：包括以下步骤，

(1)提取样品基因组DNA；

(2)特异引物设计，该特异引物的包括有上游引物Ogu-A和下游引物Ogu-B，

Ogu-A序列为5’-TTGTCCACTTTTTGTCATAATCTCA-3’，

Ogu-B序列为5’-TTTCTCGGTCCATTTTCCAC-3；

(3)吸取样品基因组DNA与试剂A进行PCR扩增；

(4)将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，根据392bp特异扩增条带的有无，来确定该样品是否含有Ogu胞质。

5.根据权利要求4所述的一种青花菜Ogu胞质快速鉴定试剂盒的检测方法，其特征在于：所述的步骤(3)的PCR扩增反应体系和程序为：反应体系为16μL，含样品基因组DNA20ng，引物各0.4μmol·L^-1，dNTPs 0.2mmol·L^-1，Mg²⁺1.5mmol·L^-1，Taq聚合酶0.64U，反应程序为：94℃预变性5min，94℃40s、56℃50s、72℃60s，35个循环，72℃延伸10min，10℃保存。

6.根据权利要求4或5所述的一种青花菜Ogu胞质快速鉴定试剂盒的检测方法，其特征在于：所述的步骤(4)为待PCR扩增结束后，加入1/4体积的溴酚蓝，在1.2％琼脂糖凝胶上电泳检测，凝胶成像系统观察，含有Ogu胞质的样品中可扩增出长度为392bp的特异条带。