[发明专利]新的何伯烷型三萜及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及何伯烷型三萜类化合物分离、制备和应用，具体涉及三个新的何伯烷型三萜、制备方法及其在抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

癌症的产生和发展过程与代谢酶密切相关，代谢酶分为I相代谢酶和II相代谢酶，II相代谢酶包括还原型谷胱甘肽S-转移酶、葡糖醛酸基转移酶、醌还原酶NAD(P)H：quinone reductase(QR)等。I相代谢酶能将致癌物的前体活化，在没有II相代谢酶作用下，能容易地与DNA等大分子发生作用，从而启动癌症的产生；而II相代谢酶被激活后，能催化被I相代谢酶激活的产物与上述物质如还原型谷胱甘肽等结合成水溶性物质而排出体外；或者在醌还原酶(Quinonereductase，QR)的作用下，将亲电性的醌转化成氢化醌，氢化醌易于葡萄糖醛酸化成水溶性物质而排出体外，该过程减少了氧化性物质的产生；通过上述过程避免活化的致癌物与正常细胞中的DNA等生物大分子作用，起到癌症预防的作用。由于QR与其它II相代谢酶表达存在相互关联，也就是说在诱导QR表达的同时，其它II相代谢酶也将被诱导表达，因此QR可以作为癌症化学预防中衡量某种化学物质(代谢酶诱导剂)是否具有抑制癌症启动作用的生物标记物。到目前为止，国外已经报到了从天然产物中发现了一些具有醌还原酶诱导作用的化合物，如从十字花科植物中发现的含硫化合物dithiolthiones(oltipraz，奥替普拉)、sulphoraphane；甾体类化合物如：withanolides；黄酮类化合物如7，4′-二羟基-3′，5′-二甲氧基异黄酮等；但是到目前为止，还未见有关何伯烷型三萜的相关报道。

发明内容

本发明的目的是提供三个新的何伯烷型三萜及其制备方法和应用。

本发明提供了三个新的何伯烷型三萜1、2和3，具有如下结构：

本发明提供了新的何伯烷型三萜的制备方法，通过以下方法制备得到，

(1)干燥伞花木地上部分经溶剂提取法，采用50％-90％的乙醇或甲醇提取，减压回收提取液得粗提物；

(2)粗提物用蒸馏水混悬得到提取物混悬溶液，依次用石油醚或环己烷、二氯甲烷或氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取；

(3)步骤(2)所得二氯甲烷或氯仿萃取物经硅胶柱色谱法分离，以石油醚/乙酸乙酯或石油醚/丙酮混合溶剂梯度洗脱；

(4)上述步骤(3)中所得流分经半制备或制备型HPLC色谱分离，以甲醇/水，乙腈/水或甲醇/乙腈/水为流动相洗脱，得到新化合物1、2和3。

本发明提供的新的何伯烷型三萜皂苷的制备方法中的步骤(2)为粗提物依次用石油醚或环己烷、二氯甲烷或氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，萃取溶剂与提取物混悬溶液体积比为1∶3～3∶1，萃取次数为2-5次。

本发明提供的新的何伯烷型三萜皂苷的制备方法中的步骤(3)为二氯甲烷或氯仿萃取物经硅胶柱色谱法分离，洗脱溶剂为10∶1～1∶1的石油醚/乙酸乙酯或石油醚/丙酮。

本发明提供的新的何伯烷型三萜皂苷的制备方法中的步骤(4)为步骤(3)洗脱流分经高效液相色谱分离，流动相为甲醇/水、乙腈/水或甲醇/乙腈/水，从甲醇/水混合溶剂比例为7∶3～1∶0、乙腈/水混合溶剂比例为4∶6～1∶0的流分中得到化合物1、2和3。

我们从植物伞花木中分离鉴定了三种新的何伯烷三萜皂苷化合物1、2和3，这三个新化合物具有醌还原酶诱导活性。本发明体现了这三个新的何伯烷型三萜的制备方法及其在抗肿瘤、肿瘤化学预防药物中的应用。

具体实施方式

下面的实施例将对本发明予以进一步的说明，但并不因此而限制本发明。

实施例1

(1)干燥伞花木嫩枝15kg经95％乙醇回流提取三次，每次2小时，减压回收提取液得乙醇粗提物；

(2)乙醇提取物混悬于8L蒸馏水，分别用等体积的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇萃取三次；

(3)步骤(2)所得二氯甲烷萃取物经硅胶柱色谱法分离，以石油醚∶乙酸乙酯8∶1，5∶1，3∶1，2∶1洗脱，

(4)上述步骤(3)中所得石油醚∶乙酸乙酯5∶1流分经半制备HPLC色谱分离，以乙腈/水梯度洗脱，乙腈/水50∶50～100∶0，洗脱时间50分钟，流速8mL/min，在保留时间25分钟得到化合物1，保留时间44分钟得到化合物2。