[发明专利]猪ROSA26启动子及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种猪启动子及其应用，尤其涉及ROSA26启动子及其应用。

背景技术

近十年来，转基因技术得到迅猛的发展和广泛的应用，其与克隆技术的结合使转基因动物的生产从基础研究向产业化迈进成为可能，而转基因动物产业化成功的关键就在于使外源基因在转基因动物中稳定、高效和广泛的表达，目前研究表明，这主要与外源基因启动子的活性相关，因此，得到能使外源基因在转基因动物中稳定高效表达的启动子是十分重要的。

在小鼠中，现已证明，ROSA26启动子无论是在各个胚胎发育时期还是在成体各种组织器官中，即几乎所有的细胞中都具有广泛且高效的活性，而且目前已有多个ROSA26转基因小鼠品系(Zambrowicz BP，Imamoto A，Fiering S，et al.(1997)Disruption of overlappingtranscripts in the ROSA beta geo 26 gene trap strain leads to widespread expressionof beta-galactosidase in mouse embryos and hematopoietic cells.Proc Natl Acad SciUSA，94(8)：3789-3794；Kisseberth WC，Brettingen NT，Lohse JK，et al.(1999)Ubiquitous expression of marker transgenes in mice and rats.Dev Biol，214(1)：128-138)。此外，最近人ROSA26启动子也以成功克隆，并也验证了其驱动外源基因在各种细胞类型中表达的广泛性(Stefan Irion，Herve Luche，Paul Gadue，et al.(2007)Identification and targeting of the ROSA26 locus in human embryonic stem cells.NatBiotechnol，25：1477-1482)。虽然ROSA26启动子在转基因小鼠中得到广泛应用，但在转基因大家畜中还未见报通。目前，转基因猪的生产多使用低等真核生物子或小鼠等其它物种来源的启动子，由于其异源性，容易受到免疫介导的排斥和表观遗传修饰，导致外源基因沉默，所以不利于外源基因在转基因猪中稳定、高效和广泛的表达。因此猪内源ROSA26启动子的鉴定与应用在转基因猪的生产和研究领域具有实际应用价值。

本发明应用的启动子是猪内源启动子，因此在猪或高等哺乳动物基因组中不会受到免疫介导的排斥和表观遗传修饰，能介导外源基因稳定高效的表达。另外，猪ROSA26启动子能介导外源基因在各个胚胎发育时期和成体各种组织器官中表达，即在几乎所有的细胞中都具有活性，能介导外源基因广泛的表达。因此本发明即获得了一个能介导外源基因在高等哺乳动物中广泛、高效和稳定表达的启动子。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种猪ROSA26启动子，用以解决转基因猪外源基因表达的不稳定性以及位置效应的不可预知性。

所述启动子的DNA序列如以下1)或2)或3)所示：

1)其DNA序列为SEQ ID NO.1所示核苷酸序列；

2)在严格条件下与2)限定的DNA序列能够杂交且能促进目的基因转录和翻译的DNA序列；

3)与1)或2)限定的DNA序列具有90％以上同源性，且能促进目的基因转录和翻译的DNA序列。

所述启动子的克隆方法包括：将人，鼠，牛中ROSA26位点的序列进行比对找到同源的保守序列；设计引物；以猪基因组为模板，克隆ROSA26启动子。

本发明所要解决的另一个技术问题是提供所述猪ROSA26启动子的应用。

所述启动子的应用，其特征在于用于猪外源或内源基因的表达。

所述启动子的应用，其特征在于用于猪外源基因或内源基因的稳定表达。

本发明获得的猪内源启动子，因此在猪或高等哺乳动物基因组中不会受到免疫介导的排斥和表观遗传修饰，能介导外源基因稳定高效的表达。另外，猪ROSA26启动子能介导外源基因在各个胚胎发育时期和成体各种组织器官中表达，即在几乎所有的细胞中都具有活性，能介导外源基因广泛的表达。因此本发明即获得了一个能介导外源基因在高等哺乳动物中广泛、高效和稳定表达的启动子，为今后相关研究奠定基础。

附图说明

图1猪内源ROSA26启动子的克隆