[发明专利]纤维连接蛋白N-端和C-端肝素结合域多肽在制备抗肝癌细胞侵袭转移的药物中应用

说明书

技术领域：

本发明涉及一种纤维连接蛋白N-端和C-端肝素结合域多肽在制备抗肝癌细胞的药物中应用。 

背景技术：

FN是已知的多功能糖蛋白，具有多个与其它分子结合的位点，包括N末端和C端肝素结合结构域。在获得高纯度FN的N端和C端肝素结合结构域多肽(分别简称rhFNHN29和rhFNHC36)的基础上，我们研究rhFNHN29和rhFNHC36多肽对人高转移肝癌细胞(MHCC97H)粘附和侵袭功能的影响，并进一步分析其分子机制。 

侵袭和转移是恶性肿瘤的重要生物学特性。癌细胞的转移需要特殊的细胞-细胞间、细胞-细胞外基质间的相互作用。这些相互作用受整合素、钙粘合素和选择素的调节。其中整合素调节癌细胞粘附到细胞外基质和细胞表面成份是关键的因素。因此，阻止癌细胞粘附至细胞外基质蛋白是治疗恶性肿瘤侵袭和转移的重要目标。 

纤维连接蛋白(简称FN)是有粘附作用的一种糖蛋白分子。前期的体外研究显示FN锚定EMC在癌细胞的趋化性上发挥重要的作用。另一方面，对癌细胞的FN表达研究发现癌细胞FN的表达下降与癌细胞的生长和转移密切相关。这些可解释癌细胞FN表达的增加，可相反地有效降低癌细胞的转移，这暗示着FN在抗癌细胞转移中的应用价值。我们的体外干预实验显示游离FN可抑制肝癌细胞的粘附和转移。暴露的FN细胞结合位点，处在游离与锚定状态之间则无此作用。游离FN与癌细胞表面分子(整合素)相互作用增加同种细胞的粘度。因此，我们相信游离FN有抑制肝癌细胞转移的作用。然而，FN的应用面临着许多的问题，如血资源的缺乏、血源性传染病的传播、其分子量达到420KD，利用基因工程技术全分子表达，目前还存在着难度。FN分子上有多个与锚定相关的活性位点，肝素结合区、胶原结合区、纤维蛋白结合区和细胞结合区。这些结合区域与多种细胞功能相关，包括粘附、迁移、分化、细胞凋亡、形态改变，止血及修复损坏等等。因此，用FN多肽的功能区域来替代FN是一个更可行的方法。对癌症治疗，有些报道显示了这样的作用。例如，FN中的RGD片段，包含粘附识别信号Arg-Gly-Asp，可抑制鼠肝细胞癌(HCC)肝内转移。CH50多肽，包含细胞I和肝素I双结合区域片段，能起到抑制肿瘤生长、侵袭和血管生成。FNIII14多肽也能有效抑制淋巴瘤细胞粘附和转移。肝素结合域是FN分子中的重要结构。一个(237AA)位于它的N-端，包含5个I型同源结构，另一个(272)位于C端，包含三个III型同源结构。我们曾利用遗传工程合成了重组N-端和C-端肝素结合域多肽(分别简称rhFNHN29和rhFNHC36)(其具体结构和蛋白序列见专利公开文献CN200810071172.2)、并进一步证实其具有结合肝素的活性。然而，这些多肽对肿瘤的治疗作用仍未见报道。我们研究了rhFNHN29和rhFNHC36多肽对人高转移性肝癌细胞 (MHCC97H)的粘附和侵袭性的作用，并分析这种现象的潜在分子机制。 

发明内容：

针对以上现有技术存在的问题，本发明的目的是提供一种纤维连接蛋白N-端和C-端肝素结合域多肽在制备抗肝癌细胞侵袭转移的药物中应用。 

本发明的目的是这样实现的，所述的二种重组纤维连接蛋白N端(又可写成N-端)和C端(C-端)肝素结合域多肽，其一的特征在于是由FN分子中N端的五个I型同源结构组成，含有从Ser46-Gly282的237个氨基酸；编码该多肽的DNA序列从403bp到1113bp，长711bp，PCR扩增片断长741bp，双酶切后片断长729bp；由酵母表达的多肽分子量为28.52kDa，纤维连接蛋白N端肝素结合域多肽(简称rhFNHN-29)。所述的另一种重组纤维连接蛋白C端肝素结合域多肽，其特征在于是由FN分子中的IH-12、III-13、III-14三个III型同源结构组成，含有从Tyr1720-Tyr1991的272个氨基酸；编码该多肽的DNA序列从5428bp到6244bp，长816bp，PCR扩增片断长835bp，双酶切后片断长828bp，由酵母表达的多肽分子量为36.09kDa，纤维连接蛋白C端肝素结合域多肽(简称rhFNHC-36)。所述的rhFNHN-29和rhFNHC-36详细内容见本申请人先前申请的专利申请号为CN200810071172.2的公开文献。本发明所述的rhFNHN-29和rhFNHC-36在制备抗肝癌细胞侵袭转移的药物中的应用。