[发明专利]中华鲟实时荧光PCR检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.中华鲟实时荧光PCR检测试剂盒，其特征是包含如下试剂：

(1)PCR MIX反应液：含有5×FQ PCR buffer、浓度为10μM的DL基因引物混合物、浓度为10μM的荧光探针、浓度为10mM的dNTPS及ddH₂O；其中DL基因引物混合物含有上游引物和下游引物，

所述上游引物DL-F序列为：

5’-GATCAAGGTATGTCGATGACA-3’；

所述下游引物DL-R序列为：

5’-CAAGAACACAAGATTAATGAG-3’；

所述荧光探针DL-P序列为：

5’-CAGTCCTGCTTTTGGGGTTCGGCAAG-3’，其5’端标记荧光报告基团，3’端标记荧光淬灭基团；

(2)Taq酶；

(3)阳性对照：浓度为1×10⁷copies/mL的中华鲟的DL基因扩增片段重组质粒。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征是所说的5×FQ PCR buffer、浓度为10μM的DL基因引物混合物、浓度为10μM的荧光探针、浓度为10mM的dNTPS及ddH₂O的体积混合比为10∶1∶0.5∶1∶30.5。

3.一种用权利要求1的试剂盒检测中华鲟的方法，包括如下步骤：

(1)提取样品的核酸；

(2)对提取的DNA进行扩增反应；反应体系中含有：PCR MIX反应液24μL、Taq酶2μL，样品DNA提取液4μL，阳性模板为重组质粒，阴性模板为ddH₂O；反应程序为：93℃反应2min，93℃反应30s，58℃反应45s，45个循环；

(3)结果分析：Ct值小于35个循环且呈S型扩增曲线的样品为阳性，即样品鉴定为中华鲟。