[发明专利]产生物表面活性剂的解淀粉芽孢杆菌BZ6-1菌株及其在油泥洗脱中的应用

说明书

一、技术领域

本发明属于污染土壤修复技术领域，尤其涉及一种产生物表面活性剂的解淀粉芽孢杆菌BZ6-1菌株及其在油泥洗脱中的应用。

二、背景技术

生物表面活性剂是微生物合成的具有双亲性(分子结构中同时具有亲水性和亲油性基团)的一类化合物。微生物产生的生物表面活性剂包括许多不同的种类，如糖脂、脂肽、多糖-脂类复合物、磷脂、脂肪酸和中性脂等。与化学表面活性剂相比，生物表面活性剂具有降低表面张力、稳定乳化液、无毒、能生物降解等特点。

含油污泥(简称油泥)是在石油开采、运输、炼制及含油污水处理过程中产生的含油固体废物。油泥中一般含油率在10～50％，含水率在40～90％。我国石油化学行业中，平均每年约产生80万吨罐底泥、池底泥。油泥中含有数百种有毒有害化合物，其中的有些化合物具有致畸、致癌以及致突变效应。因此，美国环保署将其中的某些物质列为优先污染物，并且对这些物质的排放有严格的限制，我国也将油泥列入国家危险废物名录。因此对沉积于污泥中的原油进行回收并减少油泥危害具有重大的经济与社会价值。

三、发明内容

发明目的：本发明提供一种产生物表面活性剂的解淀粉芽孢杆菌BZ6-1菌株及其在油泥洗脱中的应用。利用分离得到的一株微生物产生的生物表面活性来处理含油污泥，实现回收沉积于污泥中的原油与减少油泥危害的目的。

技术方案：一株产生物表面活性剂的解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)BZ6-1菌株，该菌株已在国家知识产权局指定的保藏单位保藏，保藏日期为2009年01月22日，保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：CGMCC No.2892。

上述菌株在油泥洗脱中的应用，步骤包括：微生物培养：将解淀粉芽孢杆菌BZ6-1菌株接种到发酵培养基中培养，20～25℃下150～300rpm培养15～20h；生物表面活性剂的制备：上述发酵液4℃下离心去菌体，上清液调pH至2.0，出现絮状沉淀，4℃静置过夜，再离心收集沉淀，用pH 2.0的酸水洗涤一次，随后将沉淀溶于NaOH溶液，使终pH值为7.0，冷冻干燥，得浅褐色疏松状固体的生物表面活性剂粗品；提纯：将粗品置CH₂Cl₂中抽提，后减压蒸干，NaOH溶液溶解，形成多泡液体，滤纸过滤，滤液再次加HCl调pH至2.0，将得到的沉淀离心，得米黄色沉淀物，真空干燥去除残留水分后即为表面活性剂纯品；油泥洗脱：向油泥中加入占油泥质量1％的表面活性剂和占油泥质量1～2％的氯化钠振荡，静置分层，完成洗脱。

上述发酵培养基配方为：柠檬酸钠10g，MgSO₄0.2g，K₂HPO₄1.0g，KH₂PO₄1.0g，NH₄NO₃1.0g，FeSO₄0.05g，CaCl₂0.02g，蒸馏水1000mL，pH 7.2。

有益效果：使用从该微生物中提取的生物表面活性剂洗脱含油污泥，油的回收率平均为87.7％，下层泥中残留的油含量为4.1％。而以水作为对照处理中，油的回收率平均为13.9％，下层泥中残留的油含量为80.6％。除此之外，经过表面活性剂处理后油泥颜色也明显变白。

四、附图说明

图1BZ6-1菌株革兰氏染色的显微照片(×1000)；

图2BZ6-1菌株透射电镜；

图3m/z 1034离子峰的MS/MS/CID碎片质谱图；

图4m/z 1048离子峰的MS/MS/CID碎片质谱图；

图5m/z 1468离子峰的MS/MS/CID碎片质谱图；

图6m/z 1482离子峰的MS/MS/CID碎片质谱图；

图7m/z 1509.96离子峰的MS/MS/CID碎片质谱图。

五、具体实施方式

以下结合实例对本发明作进一步的描述：

实施例1：

1.菌株

产生物表面活性剂菌株BZ6-1为本实验室分离得到(已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC No.2892)。实验室保存于VGPA固体培养基斜面。

2.BZ6-1菌株的鉴定

培养特征及菌体形态观察：革兰氏阳性(G⁺)(图1)，短杆状，大小为(0.6-0.7)μm×(2.0-2.5)μm(图2)，产芽孢。