[发明专利]一种口服免疫阻断猪生长抑素作用的转化子及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程领域，尤其涉及一种口服免疫阻断猪生长抑素作用的转化子及其应用。

背景技术

我国的地方猪种与国外品种相比，具有对周围环境的高度适应性、耐粗放管理、抗病性强、繁殖力高、肉质好等特点。但由于我国地方猪种生长慢、饲料利用率低，随着外来高生产性能品种的大量引入，残酷的市场竞争使我国地方猪种的数量在急剧下降，有些品种甚至濒危或趋于灭绝，如素以腌制金华火腿而著称的金华猪数量已大大减少。外来猪种虽然生长快、饲料利用率高，但肉质风味差，随着生活水平的提高，人们已越来越注重肉的品质，目前市场对高品质瘦肉的需求量迅猛增长，这种转变给我们提出了培育生长快、风味佳新品种、品系的要求和挑战。

提高动物生长速度一直是动物生产研究人员所努力的目标。但目前通过传统的遗传改良和营养调控手段来提高动物生产性能已很难再有大的进展。为了提高动物的生产性能，在饲料中添加各种违禁药物造成食物中毒的事件时有发生，因而研究一种安全、高效、对人类无毒副作用的促动物生长方法是目前养殖业所面临的迫切问题。

如果把免疫学的方法应用于动物生产性能的调控，选择对动物生长有抑制作用的激素或因子与免疫增强因子融合表达或共同免疫来增强其免疫原性，作为抗原来免疫动物，可诱发机体产生对抗该种激素或因子的抗体，从而抑制或减弱该激素或因子的生理功能。该技术可望提高动物的生产性能，对那些生长慢的品种或品系意义尤其重大，且十分安全无任何副作用。

由于大肠杆菌、酵母菌等不能在动物肠道中定植，所以不能进行口服免疫，必须将所表达的目的产物纯化进行注射免疫。蛋白纯化步骤大大增加了生产的成本和难度，使大规模生产目的蛋白制剂难以实现。同时注射免疫程序也较繁琐，不仅要耗费较大人力，对动物的应激和伤害也较大。因此迫切需要研制出一种对动物生长起促进作用的安全、方便并能进行大规模生产的口服制剂。

乳酸菌是一类在食品中应用最广泛的重要工业菌株，它包括乳酸乳球菌、乳酸杆菌等十几个属，被公认为是安全的食品级微生物。乳酸菌本身就是一种益生菌，能调节肠道微环境，帮助消化，抑制肠道有害微生物，防治腹泻，促动物生长增重。

发明内容

本发明提供了一种口服免疫阻断猪生长抑素作用的转化子及其应用，该转化子可以通过口服方式摄入并定植在猪肠道内，其分泌的融合蛋白能有效诱发猪体内产生抗猪生长抑素的抗体，从而抑制或减弱内源生长抑素对猪生长的抑制作用。

一种转化子，包括受体菌和转化到受体菌内部的重组载体，所述的受体菌为乳酸乳球菌NZ9800，重组载体的原始载体为pNZ8112，重组载体的外源目的基因包括猪生长抑素基因、霍乱毒素B亚基基因以及细胞壁锚定子M6基因。

生长抑素(Somatostatin，SST，GenBank号：NM_001009583)是一种14肽，除下丘脑分泌外，胃肠道和胰腺等组织也能产生。SST不仅对生长激素有抑制作用，还能抑制胰岛素、甲状腺素及一些促进消化吸收的胃肠激素的分泌和释放，因而它是调节动物生长的一个重要因子，在本发明中它作为免疫原。

为了增强机体免疫应答，提高免疫效果，在抗原基因上连接霍乱毒素B亚基基因，霍乱毒素B亚基(Cholera toxin B subunit，简称CTB，GenBank号：U25679)为免疫增强子，研究表明它是一种无毒性的非常有效的黏膜免疫佐剂，特别适合作为口服疫苗的免疫增强佐剂蛋白。

细胞壁锚定子M6(GenBank号：M11338)可与乳酸乳球菌细胞膜上的蛋白相结合，免疫原和免疫增强子被表达后分泌到胞外，通过细胞壁锚定子M6能够固定在细胞壁上。

原始载体pNZ8112含有强启动子即乳链菌肽A(Nisin A)的启动子NisA(GenBank号：AY303241)以及高效分泌型信号肽Usp45(GenBank号：M60178)，信号肽Usp45位于启动子NisA的下游，外源目的基因连接在信号肽的C端。

所述的生长抑素基因、霍乱毒素B亚基基因、细胞壁锚定子M6基因、启动子NisA和信号肽Usp45的碱基序列如SEQ ID NO.5～9所示。