[发明专利]一种用于地西他滨有关物质的分析方法

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种地西他滨的分析方法。

背景技术

地西他滨是目前已知的最强的DNA甲基化特异抑制剂，主要用于骨髓增生异常综合征(MDS)的治疗，适合于新发的和继发的MDS患者，以及按IPSS系统分为高危、中度2级危险、中度1级危险的MDS患者。地西他滨分子式为C₈H₁₂N₄O₄，化学结构式为：

β-构型

根据文献报道，地西他滨的主要问题是其化学不稳定性，地西他滨水解开环、去甲酰化以及端基异构化均导致其降解形成新的产物。虽然目前还不清楚地西他滨的降解产物是否具有的毒性、潜在的诱变性和DNA修复诱导作用，但地西他滨的降解不仅会引起其药物浓度的降低，还会导致其降解产物可能存在地西他滨外的药理和毒理特性，故应控制地西他滨中各类降解产物的种类和含量。

根据文献及我们的研究共发现地西他滨的水解杂质共13个，包括地西他滨α-异构体等杂质。在研究中，将α-异构体单独指出，其他杂质取有关物质英文“Related Substances”的简写“Rs”，按相对保留时间的先后顺序命名为Rs1-Rs12。地西他滨降解产物种类多，且极性大，在反相色谱柱中保留机制较差，需采用无有机相的流动相才能获得良好的分离，故在分析地西他滨有关物质时除需考虑检测到的杂质种类及数量，还需考虑分析过程中溶液的稳定性，以排除溶液稳定性原因引起的对检测的干扰。

地西他滨α-异构体是地西他滨的主要杂质，它既是地西他滨的工艺杂质也是其降解杂质，目前的检测分析方法也主要是控制α-异构体。依据文献(WO2008/083634A1 17.07.2008)报道，α-异构体具有和地西他滨相似的药理活性，虽然活性较地西他滨稍弱，但毒性更低，并且稳定性更好，所以，可以适当放宽生产过程中对α-异构体的控制限度。但应严格控制α-异构体外的其他杂质的种类和含量。中国专利“高效液相色谱法分离测定地西他滨及其对映异构体的方法”(申请号200710064576)公开了使用正己烷-低级醇溶液为流动相(流动相中可包含有机胺改性剂)分离测定地西他滨及其α-异构体，该方法虽然提供了分离测定地西他滨及其α-异构体的方法，但地西他滨样品溶解度不好，分离过程中地西他滨易发生水解，影响结果准确性，且不适于分离α-异构体以外的有关物质。中国专利“高效液相色谱法分离测定地西他滨有关物质及其对映异构体的方法”(申请号200910089574.X)，该方法使用HILIC色谱柱，以乙腈-水为流动相，平衡时间长，色谱峰分离度较差。

地西他滨是FDA批准上市治疗MDS的三种药物中的一种，对在人类的其他癌症和镰刀细胞性贫血和难治性慢性粒细胞白血病(CML)的使用也正处于临床研究阶段，如上所述，地西他滨的降解产物可能存在地西他滨外的药理和毒理特性，所以，应该建立一种新的方法用于控制地西他滨有关物质的种类和含量，这种新方法的建立是十分必要的。

发明内容

基于以上原因，本发明提供了一种用于地西他滨有关物质的分析方法，该方法不仅能保证分析过程中地西他滨的稳定性，而且能有效的检出地西他滨中的各种有关物质。

本发明通过以下技术方案实现：

一种地西他滨有关物质的分析方法，包括地西他滨原料药及注射用地西他滨，采用高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充料，检测波长为210-240nm，流速为1.0-3.0ml/min，柱温为10-30℃，使用低级醇溶解供试品及对照品，供试品及对照品溶液进样量为1-20μl，流动相为pH6.0-7.5的浓度为0.01-0.05mol/L的磷酸盐溶液。

其中检测波长为220nm。

其中流速为1.5ml/min。

其中柱温为25℃。

其中所述低级醇包括甲醇、乙醇、异丙醇、异戊醇。

其中样品进样量为5ul。

其中所述磷酸盐为：磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠中的一种或几种。

其中所述磷酸盐溶液的pH为6.8，浓度为0.03mol/L。

分析方法确证实验：

1.检测波长的选择