[发明专利]一种提高产1，3-丙二醇融合菌筛选效率的方法

权利要求书

1.一种提高产1，3-丙二醇融合菌筛选效率的方法，包括如下过程：

(1)选择亲本菌株，或菌种经适宜培养得到亲本菌株；

(2)亲本菌株进行酶解脱壁得到原生质体；

(3)原生质体进行灭活处理得到灭活原生质体；

(4)灭活的原生质体进行原生质体融合；

(5)用含有目的发酵产物的培养基筛选融合子，选择性能优良的目的融合菌；

(6)步骤(5)获得的优良融合菌株作为亲本进入下一轮基因组重排过程，至获得综合性能优良的菌株；

其特征在于：步骤(5)中每轮获得目的融合菌补料发酵终点的发酵液进行过滤除菌后作为选择培养基，用于筛选下一轮目的融合菌。

2.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：亲本菌株为两株，为肺炎克雷伯氏杆菌同种之间融合，或者是肺炎克雷伯氏杆菌与产酸克雷伯氏杆菌间跨属融合，或者是肺炎克雷伯氏杆菌与大肠杆菌之间跨属融合。

3.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：亲本菌株酶解脱壁采用Tris-Cl(Tris盐酸缓冲液)溶解的溶菌酶溶液进行酶解脱壁处理。

4.按照权利要求1或3所述的方法，其特征在于：亲本菌株在酶解脱壁处理之前进行预处理过程，预处理过程包括紫外诱变、亚硝基胍诱变、硫酸二乙酯诱变、Tris-Cl缓冲液预处理中的一种或几种。

5.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：原生质体进行灭活处理采用紫外灭活或热灭活方法。

6.按照权利要求5所述的方法，其特征在于：采用菌株同种之间融合时，不同亲本菌株的酶解脱壁和原生质体灭活步骤分别进行；采用不同菌株跨属融合时，不同亲本菌株的酶解脱壁和原生质体灭活步骤分别进行，或者在同一体系中同时进行。

7.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：酶解脱壁得到原生质体或灭活原生质体进行膜过滤处理。

8.按照权利要求7所述的方法，其特征在于：膜过滤处理采用0.22～0.85μm滤膜过滤除去对原生质体融合有影响的菌体。

9.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：灭活原生质体在聚乙二醇溶液中进行融合。

10.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：融合子的筛选过程采用补料发酵方式在培养基中对融合子进行筛选，以每轮筛选的补料发酵终点时的发酵液经过滤除菌后作为下一轮融合子筛的培养基。