[发明专利]结核金标快速检测试剂

说明书

一、技术领域

本发明涉及一种结核抗体金标快速检测试剂。 

二、背景技术

各种资料显示全球约三分之一人口感染了结核菌。每年约有800万新病例，年死亡人数超过150万。为此结核病称为20002001年WHO防治传染病的重点控制对象。2000年12月20日卫生部公布了第四次全国结核病流行病学抽样调查结果：我国结核病情相当严重，在部分地区甚至有蔓延的趋势。据调查全国有1/3以上人口感染了结核菌，其中有10％的人已经发病；如不采取有效措施，在未来十年内，可能有3000万人发生结核。目前我国传染性结核患病率为157.8/10万，据估算，全国现有传染性肺结核患者200万人，西部12个省、市、自治区的病情尤其严重，在西部地区传染性肺结核患病率高达197人/10万人，且呈蔓延趋势，现已有传染性肺结核病人65万人。 

控制结核病的重点是监控痰涂片阳性结核病患者，使发病患者及早得到治疗。对结核菌感染者进行早期监控和治疗防止发病。 

目前诊断结核的方法主要有：痰涂片结核菌检测、结核菌素试验(PPD)、结核杆菌聚合酶链反应(PCR)和结核杆菌抗体检测等方法。在上述方法中痰涂片方法的特异性最高达100％，但敏感性低为22.2％。结核菌素实验(PPD试验)敏感性有所提高，但存在特性差，，易受BCG抗体的影响，而且结果判定时间太长。PCR虽然敏感性高，，但同时存在特意性差；而且实验仪器设备昂贵，对操作人员和环境要求高，人为误差较大。结核杆菌抗体检测的敏感性高达60-80％，但也同样存在特异性不高的问题。因此，在结核的诊断中，几种方法可以相互配合。 

在上述几种方法中相比，结核抗体检测方法比较简便，快速。有利于结核早期诊断。目前临床已经应用的结核抗体检测方法有酶联免疫吸附试验ELISA，但ELISA法，但ELISA法实验过程需要2-3步，结果判定需1--2小时；而且需要专门实验设施和专业操作人员。 

三、发明内容

本发明的主要目的是为了提供一种结核金标快速检测试剂，该试剂具有高度的种特异性和高灵敏度，而且速度快、操作简便，无需专门设施。 

本发明的另一目的是为了提供一种结核金标快速检测试剂的制备方法，该方法简单、稳定性、、重复性好。 

本发明的主要目的可通过如下措施来实现： 

一种结核金标快速检测试剂的制备方法包括金标抗体层和检测层及具上包被检测线和控制 线的制备，以及试剂的组装。 

所述的金标抗体层制备包括：I胶体金的制备，在浓度为0.01-0.03％的滤金酸中加入其体积的1.2-1.8％、浓度为1％的柠檬酸三钠，煮沸10-20分钟，还原成15-50纳米的胶体金原子液；ii结核抗原的制备，取结核菌标准株TBRV株培养物溶于生理盐水离心分离得沉淀物，再将沉淀物溶于生理盐水后再离心分离，如此反复洗涤4-8次除去培养基成份；然后将沉淀物超声粉碎12-15次，每次30秒，将粉碎物经3.8-4.5万g高速离心，取上清液过凝胶层析住，收集结核抗原活性峰；iii结核抗原胶体金标记，在100ml胶体金溶液中加入2-10mg上述ii制备的结核抗原；再在上述胶体金溶液中按0.1-0.6g/100m l加入动物血清蛋白；然后又在上述胶体金溶液中按6-12ml加入10％的盐液；最后离心去沉淀，取上清再离心得沉淀物，将沉淀物按4-10ml溶于0.02M、PH7.4Tris-HCl含0.1-0.6％动物血清白蛋白、0.02％的叠氮钠得结核抗原胶体金溶液；iv将结核抗原胶体金溶液浸着玻璃纤维或无纺布，浸入量以浸入液体开始向外流出为止，然后在37℃下干燥得金标抗体层。 

所述的凝胶层析住选自SephardexG100、SephardexG200、SepharclyS100、SepharclyS200、SepharclyS300中的一种。 

所述的检测层的制备，在制备的结核抗原兔、羊抗结核杆菌抗体中加入固定剂，然后喷膜机将结核抗原和兔、羊抗结核杆菌抗体喷在纤维素膜上形成检测线；再用0.01MPH7.0PBS液含10％小牛血清封闭30分钟漂洗、干燥得检测层。 

所述的固定剂选自甲醛、丙酮中的一样。 

本发明相比现有技术具有以下有点： 

1、本发明的结核金标快速检测试剂采用一步法，具有高度的特异性和高灵敏度，其检测快速，结果判定在3-15分钟内完成，无需专门试验设施、实验条件和专门的操作人员，适合结核感染人群的初筛和流行病学调查。 

2、本发明的检测试剂的制备方法猪油制作简便，稳定性，重复性好。