[发明专利]一种检测地沟油的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测地沟油的方法。

背景技术

“地沟油”又称为“毛油”，其来源主要有：下水道中的油腻漂浮物；将宾馆、酒楼的剩饭、剩菜经过简单加工、提炼出的油；用于油炸食品的油使用次数超过规定要求，或是劣质猪肉、猪内脏、猪皮加工以及提炼后产出的油。被捞回的“地沟油”通常会在勾兑一些新油之后流入食品、餐饮行业。据实验测定，长期摄入“地沟油”将会对人体造成伤害，如发育障碍、易患肠炎，并有肝、心和肾肿大以及脂肪肝等病变。此外，“地沟油”受污染产生的黄曲霉毒性不仅易使人发生肝癌，也有可能引发其他部位癌变，如胃腺癌、肾癌、直肠癌及乳癌、卵巢、小肠等部位癌变。

经过精炼的“地沟油”，从外观和感官上很难与普通一级油区分。国内目前还没有比较好而且方便的检测方法。传统的检测方法只抓住地沟油中的某个特性，但没有一种方法能同时有效检测不同来源的地沟油，导致有时检测误差较大，更有误判的可能。如果地沟油掺入含量较少时，也检测不出来。

现有的国家研究机构的检测方法主要包括下列几种：

电导率检测法。因为油脂在烹饪过程中接触了洗涤剂、金属器皿，或长期停留在重金属环境中，因此地沟油的电导率值明显高于普通食用油。在武汉工业学院，一名姓刘的本科生曾经找到一种30分钟内检测地沟油的方法。他通过检测油的电导率，得出地沟油电导率是一级食用油的5-7倍的结论。这种方法对于“泔水油”的检测相对有效。然而它的缺陷在于，仅仅适用于地沟油添加量在20％以上的食品油检测。

胆固醇检测法。因为地沟油是多种动、植物油脂的混合物，其中动物脂肪中普遍含有胆固醇，而在人们食用的正规植物油中一般不含或只含有极少量的胆固醇。利用这一特性可以鉴别出某些地沟油，但同样要求地沟油的添加量在10％以上。

蓝色试纸。随着地沟油所掺比例不断增加，蓝色试纸会呈现出黄绿色、淡黄色和亮黄色等颜色变化。这是依据油的“积性”来检测油的纯度，当油中有氯化钠(食盐)时，其积性大，反之则小，而正规渠道生产的食用油中通常没有氯化钠。但这一方法同样受到地沟油的添加比例的限制。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测地沟油的方法。包括鉴别食用油中是否掺有地沟油及其含量。该方法能快速的检测出食用油中是否含有地沟油、含量是多少。

由于地沟油的原料中主要是由各种潲水、用于油炸食品的油、劣质猪肉、猪内脏、猪皮加工以及提炼后产出的油炼制而成，这些原料中都含有一些动物性原料，因此含有相应的核酸成分，而目前市面上的合格食用油多为植物油，不存在动物性成分。本发明即是利用实时荧光PCR法检测动物性成分中所含的动物特有的基因来鉴定合格食用油中是否掺有地沟油。

本发明提供了一种检测地沟油的方法，为对待检油提取DNA后，以所提取的DNA为模板，利用实时荧光定量PCR扩增动物特有基因片段。

进一步的，所述食用油为常见的植物性食用油，以大豆、花生、芝麻、粟米、橄榄、山茶、葵花子、核桃、芥花子等植物性原料经炼制加工获得的可食用的油。

进一步的，在利用实时荧光定量PCR扩增动物特有基因片段后，根据Ct值来判断食用油中是否含有地沟油，或者根据标准品检测拟合的标准曲线来确定食用油中地沟油的含量。

定性检测Ct值的检测限采用阳性对照品梯度稀释方法来确定。

进一步的，所述动物特有基因片段符合下列要求：1)所选片段与植物存在较大差异，较佳的，相似性低于20％；2)所选片段在动物物种内具有保守性。

符合上述要求的动物特有基因片段可具体采用包括下列方法筛选获得：

1)参考文献，获得多个候选基因；

2)多个候选基因经过blast与GenBank数据库现有数据进行比对，筛选出猪、牛、羊、鸡、鸭等动物中与常见食用油来源的葵花、油菜、大豆及橄榄差异较大的特异基因；

3)多物种目的基因序列通过序列比对，获得保守区域；

4)所选片段再次通过blast验证特异性和保守性。

进一步的，所述动物特有基因片段为猪、牛、羊、鸡、鸭或鱼的CYTB(细胞色素b)基因的保守区域。可以是所述CYTB基因的全长序列(1-1140)，也可以是所述CYTB基因的部分序列，如核苷酸序列为所述CYTB基因的1-500位的基因片段，具体可以是实施例所列举的SEQ ID NO：1。