[发明专利]固氮巨大芽孢杆菌株DL7及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是一株固氮巨大芽孢杆菌株(Bacillusmegaterium)DL7及其应用。

背景技术

目前全世界约有5000万hm²的热带人工林，且每年增加300万hm²左右(Binkley et al.，2004)。其中，桉树(Eucalyptus sp.)占热带人工林总面积的40％左右，木材产量占50％以上，正发挥着越来越重要的作用。中国的桉树人工林面积已达170万hm²，桉树已成为我国三大造林树种之一，造林面积仅次于印度和巴西，居世界第三位。桉树速生、高产、优质，最优杂交家系年平均生长量可达69.8m³/hm²，最优无性系年平均生长量达64.8m³/hm²。桉树产业的发展带动了交通运输业、造纸、人造纤维、人造板工业等的发展，同时为社会提供了大量的劳动就业机会，为社会稳定起到了重要的作用。

桉树人工林也存在很多问题，例如：(1)生产力问题。桉树人工林2、3、4代木材蓄积量分别比第1代下降了20.9％，38.7％和50.5％；生物量分别下降了19.6％，26.7％和44.6％。可见，桉树人工林的地力衰退问题是相当严重的。许多桉树林轮伐期只需4～5年。这意味着被带走的养分越来越多。除了过度收获外，全垦整地和不合理施肥也会导致桉树人工林地力衰退。(2)水分问题。20世纪80年代以来，桉树人工林是否较其他树种人工林消耗更多的土壤水分成为关注的焦点。对比观测地下水位，发现桉树林地下水位深9～11m、裸地为1～4m、混交林为3～4m。

桉树是不具有固氮自肥能力的非豆科植物，目前桉树人工林的速生高产完全依赖施用N、P、K复合肥，导致土壤微量元素缺乏，土壤肥力降低，出现生产力下降；大量施用化学肥料，导致土壤板结，土壤结构被破坏，林地保水能力差而出现的水分问题。这是实现桉树可持续发展的最大障碍。然而通过人工接种固氮菌，建立桉树根际联合固氮体系，使原本不能共生固氮的桉树获得固氮能力，将空气中的分子态氮变为可供桉树吸收利用的氨态氮，促进桉树生长。这对于日趋贫瘠的桉树林地土壤改良，地力保持具有重要意义和应用前景。

发明内容

本发明的目的是提供经过筛选、具有高效固氮活性、对桉树苗木有明显促进生长作用的一株固氮巨大芽孢杆菌株(Bacillus megaterium)DL7。

本发明的另一个目的是提供一株固氮巨大芽孢杆菌株(Bacillus megaterium)DL7的培养方法和在制备促进桉树苗木生长的生物菌肥中的应用。

本发明人在广泛深入的研究基础上，从非豆科植物罗汉松根瘤分离纯化获得内生细菌，对其生物学特性、生理生化特性、固氮结瘤能力、接种苗木促进生长等系统试验和检测。

一株固氮巨大芽孢杆菌株(Bacillus megaterium)DL7的培养方法，包括如下步骤：

从短叶罗汉松侧根上采集有根瘤的细根，用自来水冲洗干净后，用75％乙醇对根瘤表面进行消毒1分钟，再用0.1％的酸性氯化汞消毒5～6分钟。将根瘤置于灭过菌的研钵中轻轻研磨。取汁液用划线法接种于已加刚果红的YMA培养基上，28℃培养2～3天，挑选不吸刚果红的菌落，重复划线筛选，然后根据菌落大小、形状、表面光泽、隆起程度、透明程度、边缘形状和菌落颜色的差别，挑选单菌落，经过光学显微镜检查得到所需的纯化完全的菌株。

所述YMA培养基成分及含量为：磷酸氢二钾0.5g，硫酸镁0.5g，氯化钠0.1g，甘露醇10.0g，酵母膏0.4g，琼脂粉15g，水1000ml，自然pH6.8，121℃蒸汽灭菌20分钟。

固氮巨大芽孢杆菌株DL7的特性

1.形态特性

在YMA培养基上，菌株的菌落为圆形、乳白色、产粘液、边缘整齐。有鞭毛，可运动。

2.培养特性

该菌的最适生长条件为：pH＝7.2～7.4，温度28℃。能利用广泛的碳源和氮源。

3.生理特性

经革兰氏染色反应镜检为阴性，呈直杆状。

4.功能特性