[发明专利]真菌的菌落PCR方法和鉴别病原性真菌的方法有效
| 申请号： | 201010227571.0 | 申请日： | 2010-07-16 |
| 公开（公告）号： | CN101851684A | 公开（公告）日： | 2010-10-06 |
| 发明（设计）人： | 刘维达;张晓利;王淼淼;葛一平;吕桂霞;沈永年;鲍伟 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院皮肤病研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 南京天翼专利代理有限责任公司 32112 | 代理人： | 周静 |
| 地址： | 210042 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 真菌 菌落 pcr 方法 鉴别 原性 | ||
1.一种真菌的菌落PCR方法，其特征在于，将真菌培养物接种于培养基上，进行培养，培养基上刚长出肉眼可见的菌落，作为实验可用菌落，制备DNA模板，进行菌落PCR扩增。
2.如权利要求1所述的真菌的菌落PCR方法，其特征在于，当真菌为丝状真菌时，制备DNA模板的方法为：在20μl无菌1×TE缓冲液中加入高压灭菌的石英砂，加入实验可用菌落菌丝体，煮沸5min，然后立即冷冻5～10min，反复2次，然后涡旋3～5min，12000～14000r/min离心5～10min，取上清液作为DNA模板。
3.如权利要求1所述的真菌的菌落PCR方法，其特征在于，当真菌为酵母菌时，制备DNA模板的方法为：在20μl无菌1×TE缓冲液加入实验可用菌落菌体，煮沸3min，然后立即冷冻5～10min，12000～14000r/min离心5～10min，取上清液作为DNA模板。
4.如权利要求2或3所述的真菌的菌落PCR方法，其特征在于，冷冻温度为-15～-20℃。
5.一种鉴别病原性真菌的方法，其特征在于，将临床标本或病原性真菌培养物接种于培养基上，进行培养，培养基上刚长出肉眼可见的菌落，视为实验可用菌落，制备DNA模板，进行菌落PCR扩增，检测扩增产物。
6.如权利要求5所述的鉴别病原性真菌的方法，其特征在于，当病原性真菌为丝状真菌时，制备DNA模板的方法为：在20μl无菌1×TE缓冲液中加入高压灭菌的石英砂，加入少量菌丝体，煮沸5min，然后立即冷冻5～10min，反复2次，然后涡旋3～5min，12000～14000r/min离心5～10min，取上清液作为DNA模板。
7.如权利要求5所述的鉴别病原性真菌的方法，其特征在于，当病原性真菌为酵母菌时，制备DNA模板的方法为：在20μl无菌1×TE缓冲液加入少量菌体，煮沸3min，然后立即冷冻5～10min，12000～14000r/min离心5～10min，取上清液作为DNA模板。
8.如权利要求6或7所述的鉴别病原性真菌的方法，其特征在于，冷冻温度为-15～-20℃。
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