[发明专利]棘孢曲霉

说明书

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，特别是涉及一种具有广谱的高抗菌活性的微生物菌株。

背景技术

印楝(Azadirachta indica A.Juss)为一种热带树种，原产于印度和缅甸，不仅具有昆虫拒食和杀虫活性，还有抑制致病真菌和细菌生长、消炎、抗肿瘤、免疫调节等生理活性，具有较高的生物农药和医药价值。大多数活性物质为四降三萜类化合物，此外还包括一些二萜、三萜、五降三萜及少量的非萜类化合物。印度研究人员曾经从生长在印度的印楝植物中分离和鉴定了内生真菌(Rajagopal K et al，Current Science，2000，78，1375；Mahesh B et al，Current Science，2005，88，218；Verma VC et al，Microbial Ecology，2007，54，119)。

发明内容

本发明的目的在于提供一种分离自中国云南省元江县印楝(Azadirachtaindica A.Juss)植物活体中具有广谱的高抗菌活性的微生物菌株-棘孢曲霉。

本发明所述的棘孢曲霉系从中国云南省元江县印楝植物活体中分离获得。现在国家知识产权局认可的保藏单位保藏，保藏单位名称：中国典型培养物保藏中心，简称：CCTCC，保藏单位地址：中国，武汉大学，邮政编码：430072。保藏日期为2010年3月25日，保藏编号为CCTCC NO：M2010062。

本发明所述的棘孢曲霉命名为棘孢曲霉(Aspergillus aculeatus)YM311498，现保藏在国家知识产权局认可的保藏单位，保藏编号为CCTCC NO：M2010062。

该微生物属于内生真菌，经形态观察、培养特征以及分子生物学ITS rDNA基因序列分析，确定其分类学地位属于半知菌类(Deuteromycotina)曲霉属(Aspergillus)的棘孢曲霉(Aspergillus aculeatus)，菌株编号为YM311498。

棘孢曲霉Aspergillus aculeatus YM 311498在察氏培养基上，28℃培养7d后，菌落直径达4.4cm，质地致密，菌落平坦，中央部分土黄色，周围颜色白黄色背面颜色黄色，形状呈不规则圆形，有沟深陷培养基中。分生孢子结构较多，初为微黄色，老后变深呈土黄褐色。在PDA培养基上，28℃培养7d后，菌落直径达4.7cm，10d达4.8cm，质地较薄，中央为土黄色，四周近白黄色，老后菌落呈土褐色，气生菌丝较多，背面淡黄色至黄褐色。在麦芽汁培养基上28℃培养7d，菌落长满整个培养皿，质地致密略呈絮状，中央部分黄色略带红色，有沟和放射纹出现。

以ITS rDNA基因序列同源性为基础构建形成包括菌株YM 311498在内的19株相关真菌的系统发育树，可知棘孢曲霉YM311498碱基序列相似性为100％，与本属菌种Aspergillus aculeatus无差异。

菌株YM 311498的培养基培养特征：

①察氏培养基28℃培养7d，菌落直径达4.4cm，质地致密，菌落平坦，中央部分土黄色，周围颜色白黄色背面颜色黄色，形状呈不规则圆形，有沟深陷培养基中。分生孢子结构较多，初为微黄色，老后变深呈土黄褐色。

②PDA培养基28℃培养7d，菌落直径达4.7cm，10d达4.8cm，质地较薄，中央为土黄色，四周近白黄色，老后菌落呈土褐色，气生菌丝较多，背面淡黄色至黄褐色。

③麦芽汁培养基28℃培养7d，菌落长满整个培养皿，质地致密略呈絮状，中央部分黄色略带红色，有沟和放射纹出现。

菌株YM 311498的形态特征(见图1、图2、图3、图4)：

①无性世代  分生孢子梗长，具有足细胞；分生孢子梗顶端膨大成近球形，顶囊稍大，半球形，约2/3表面可育，直径10～14μm；孢囊上生小梗，梗基1～2μm×2～3μm，分生孢子头致密直柱状，颜色显橙褐色，直径90～110μm×25～50μm；分生孢子球形，大小约2.5μm，壁周围长满刺，刺长0.4～0.5μm。分生孢子梗壁在光学显微镜及电镜下近平滑。

②有性世代未发现。

菌株YM 311498的分子生物学特征：

采用分子生物学PCR技术，DNA序列测定分析，YM 311498菌株ITS rDNA基因组由543个碱基(bp)组成。以ITS rDNA序列为基础构建的系统发育树，该菌与Aspergillus aculeatus的进化距离最近(图4)。

菌株YM 311498的发酵培养特征：

①培养基：PDB培养基。