[发明专利]一种对虾白斑综合征病毒快速检测试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种对虾白斑综合征病毒快速检测试纸条及其制作方法。

背景技术

对虾白斑综合症(White spot syndrome，WSS)是当前全球对虾养殖业所面临的危害性最大、影响范围最广的病害之一，已成为目前制约对虾养殖业发展的主要瓶颈。WSS为烈性的暴发性传染病，病程短，感染发病后3～10d内可达100％的死亡率，因此，虾塘一旦发病，几乎全军覆没、颗粒无收。该病病原为对虾白斑综合症病毒(White spot syndrome virus，WSSV)，是呈杆状具囊膜的DNA病毒。大量研究表明囊膜蛋白的有无是其感染与否的关键，而且中和试验表明囊膜蛋白VP28可能与病毒的系统感染有关。WSSV具有相当广泛的宿主，甲壳类(蟹虾类和桡足类)、昆虫类中均有其中间宿主和生物媒介，这对海洋生态环境造成了一定的威胁，也大大增加了该病的防治难度。

虽然此病引起了世界各国的广泛关注，对WSSV的研究也日趋深入，但目前仍然没有很好的措施来控制WSS的发生，其危害依然存在。由于目前没有特效的治疗药物，早期预防就显得尤其重要，而快速有效地检测方法将为该病的预防研究提供有力的技术支撑。通过对不同生活阶段的对虾以及对虾生活环境中的有关生物进行病毒检测，对了解病毒的感染与传播，进而控制该病毒的继续蔓延意义重大。同时，准确、快速地检测WSSV在优质虾苗培育、流行病学调查、WSS的早期诊断和预防、养殖环境的监测及防治效果的评估、养殖场WSS病情调查与控制等方面具有广泛的应用价值和重要的社会经济意义。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种对虾白斑综合征病毒快速检测试纸条及其制作方法。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种对虾白斑综合征病毒快速检测试纸条，它包括基板、样品垫、硝酸纤维素膜、检测线、质控线、吸水垫、结合垫。其中，所述样品垫、结合垫、检测线、质控线、硝酸纤维素膜和吸水垫依次固定在基板上。所述结合垫是玻璃纤维素膜结合垫，其中含标记有免疫胶体金颗粒的抗VP28蛋白的鼠源性单克隆抗体，可与样品中的病毒VP28蛋白发生抗原-抗体特异性结合。所述VP28蛋白具有Seq id NO.1所示的氨基酸序列。

一种上述试纸条的制备方法，该方法包括以下步骤：

(1)WSSV病毒的分离纯化。

(2)用纯化WSSV直接免疫新西兰兔子制备多克隆抗体。

(3)以WSSV病毒基因组为模板，克隆其囊膜蛋白VP28基因，在大肠杆菌中进行融合表达并用Ni柱进行蛋白纯化；VP28基因核苷酸序列如Seq id NO.2所示，重组VP28蛋白氨基酸序列如Seq id NO.3所示

(5)纯化的重组VP28蛋白免疫Balb/c小鼠制备单克隆抗体；

(5)用单克隆抗体制备检测试纸条。

本发明的有益效果是，本发明利用基因工程技术，克隆对虾白斑综合征病毒的囊膜蛋白结构基因，并在大肠杆菌内表达，以方便地获得大量廉价的重组抗原，纯化后即可用于免疫学诊断。由此方法得到的重组抗原及快速检测试纸条可以快速、简便地检测WSSV，且耗时短、准确率高、特异性强，无需特殊仪器，无需训练有素的专业人员，可在对虾养殖场大规模推广应用。

附图说明

图1为WSSV快速检测试纸条结构示意图。

具体实施方式

如图1所示，本发明对虾白斑综合征病毒快速检测试纸条包括基板1、样品垫2、硝酸纤维素膜3、检测线4，质控线5、吸水垫6、结合垫7。样品垫2、结合垫7、检测线4，质控线5、硝酸纤维素膜3、吸水垫6依次固定在基板1上。

基板1为塑胶支撑板。

样品垫2是试纸条检测时直接与样品溶液互相接触的部分，起到了过滤样品溶液中的非可溶性杂质成分的作用。

硝酸纤维素膜3又称NC膜。

检测线4含有与病毒WSSV发生抗原-抗体特异性反应的兔源性多克隆抗体。

质控线5含有与过量的金标抗体发生抗原-抗体特异性反应的羊抗鼠多克隆抗体抗体。

吸水垫6为纯白滤纸，100％的植物长纤维，具极强的吸水能力。

结合垫7是玻璃纤维素膜结合垫中含标记有免疫胶体金颗粒的抗VP28蛋白的鼠源性单克隆抗体，可与样品中的病毒VP28蛋白发生抗原-抗体特异性结合。

VP28蛋白氨基酸序列如Seq id NO.1所示。

本发明对虾白斑综合征病毒快速检测试纸条的制作方法，包括以下步骤：

1、WSSV病毒的分离纯化；