[发明专利]一种利用稀土元素提高灵芝三萜产量的液体发酵方法

说明书

技术领域

本发明涉及发酵工程领域，具体涉及一种利用稀土元素提高灵芝三萜的液体发酵方法。 

背景技术

灵芝(Ganoderma lucidum)为担子菌纲、多孔菌科、灵芝菌属真菌。在中国古代被盛传为仙草，古代医学家发现灵芝通过扶正固本使人体处于平衡状态。灵芝三萜是灵芝最主要的生理活性物质之一，现代药理学研究表明灵芝具有抗肿瘤、抗衰老、防止动脉硬化等作用，以及护肝保肝、抗病毒、抗辐射等功能。在灵芝药用价值被广泛揭示的同时，灵芝三萜的产量成为抑制其应用的限制因素，因为在自然界中野生灵芝十分稀少，远不能满足人们的需要。采用灵芝液体发酵的方法生产灵芝三萜因为具有生产周期短、劳动力省以及受外部环境影响小等优点被认为是一种有效的方法。 

但灵芝三萜的发酵水平不高，产量偏低限制了其工业化生产的发展。目前，国内外学者对灵芝三萜的发酵研究主要集中在培养基组成、溶氧、pH值及产物提取分离等工艺层面上，对灵芝三萜发酵水平提高有限，还不能满足现代工业化发酵生产的需要。 

CN101353689A(CN200810143120.1)公开了一种提高灵芝发酵液中灵芝三萜产量的方法，使用灵芝属Ganoderma lucidum(Leyss ex Fr.)Karst.的菌种，菌株保藏号为CCGMC5.616，通过如下步骤进行：1、将灵芝菌种接种含有碳源、氮源、矿物元素成分的培养基，在温度为26-30℃、转速为130-180r/min条件下回转式深层发酵1～5天；2、补加棕榈酸1.5-3.0g/L后，在温度为25-30℃、转速为100-180r/min条件下回转式深层发酵3～6天结束；3、从发酵液中提取灵芝三萜，产量为396.2mg/L。该发明仅提取了发酵液中三萜(即胞外三萜)的产量，发酵菌丝体三萜(即胞内三萜)没有涉及，使产量部分损失。稀土元素是化学元素周期表中镧系元素及两个相关元素钪和钇的总称，我国稀土资源丰富，占世界贮量的80％。目前，稀土元素的应用越来越广泛，不仅应用于各工业部门，其在农业、医药、微生物等生物学领域的应用研究也越来越活跃。近年来有关利用稀土元素提高微生物发酵产物的研究也有报道，参见王怡平等.稀土元素对红酵母的生长及类胡萝卜素合成的影响.微生物学通报，1999，26(2)：117-119；以及李增利.稀土元素镨、钕、铒对红菇多糖深层发酵的影响.食品科学，2007，28(12)：312-316。目前，稀土元素在灵芝液体发酵上的应用研究尚未见报道。 

发明内容

本发明旨在提供稀土元素在灵芝三萜液体发酵中的应用，同时提供稀土元素在灵芝三萜发酵中的使用方法，从而提供一种工艺简单、成本低廉、效果显著，利用稀土元素提高 灵芝三萜产量的液体发酵方法，本方法可用于灵芝三萜的工业化生产。 

本发明所述的灵芝三萜产量包括灵芝胞外三萜和胞内三萜产量。 

本发明的技术方案如下： 

一种利用稀土元素提高灵芝三萜产量的液体发酵方法，包括以下步骤： 

(1)将灵芝菌种接种到PD液体发酵培养基中进行发酵培养，培养条件为摇床转速100～180r/min，温度25～30℃，时间5～8天，得到灵芝种子液。 

所述的灵芝菌种为泰山赤灵芝(Ganoderma lucidum)，菌种编号为CGMCC No.5.644； 

所述的PD液体发酵培养基组成为马铃薯200g、葡萄糖20g和蒸馏水1000mL； 

(2)将步骤(1)制得的灵芝种子液按4-6％体积比接种量接入到含有浓度为0.001-0.15mmol/L稀土元素的PD液体培养基中进行发酵培养，培养条件为摇床转速100～180r/min，温度25～30℃，时间5～8天，得发酵液和灵芝菌丝体混合物，分离出发酵液及灵芝菌丝体备用。 

所述的稀土元素为镨Pr³⁺、钕Nd³⁺或镧La³⁺； 

所述的PD液体发酵培养基组成为马铃薯200g、葡萄糖20g和蒸馏水1000mL。 

(3)从步骤(2)所得的发酵液中提取灵芝胞外三萜，从灵芝菌丝体提取灵芝胞内三萜，采用现有技术即可。