[发明专利]中国对虾ES15微卫星标记的检测方法

权利要求书

1.一种中国对虾ES15微卫星标记的检测方法，其特征在于方法是：首先提取中国对虾基因组DNA并稀释备用；再利用中国对虾cDNA文库中的含有微卫星核心序列，在其序列两端设计特异性引物；然后使用该引物对中国对虾不同地理群或中国对虾群内个体的基因组DNA进行PCR扩增，对PCR产物进行检测；利用产物出现的条带进行分析，确定每个个体的基因型，并获得中国对虾的遗传多态性图谱；

提取中国对虾基因组DNA，将其稀释为50ng/μl，每个PCR反应中加入2μl，反应总体积为20μl；ES15微卫星核心序列的特异性引物序列分别为：正链5’-GTT TAT GCT ACT TTG GGA CT-3’，负链5’-CTC CTC CTC CTT CTC CTC-3’，使用该引物时的退火温度为50℃；

PCR扩增的加样参数为：每个PCR反应总体积为20μl，包括100ng中国对虾基因组DNA；10X PCR Buffer，2.0μl；Mg⁺⁺2.0mmol/L；Tag酶1U；dNTP各0.1mmol/L；本发明的引物各0.2μmol/L；加ddH₂O至20μl。使用该引物时设置PCR仪的程序参数为：94℃变性5min；94℃40sec，64℃40sec，72℃40sec，，35个循环；72℃延伸10min，4℃保存；

PCR产物的检测：将PCR产物在8％的变性聚丙烯酰胺凝胶，12W恒功率电泳1-1.5小时进行分离；将胶板通过10％的冰醋酸溶液20min→蒸馏水6min→0.1％的硝酸银溶液20min→3％的碳酸钠溶液显色数分钟，终止反应即可得到中国对虾在ES15基因座位的多态性图谱。