[发明专利]一种菊糖果糖转移酶的克隆及其高效表达

权利要求书

1.一种来源于金黄节杆菌(Arthrobacter aurescens)SK 8.001的菊糖果糖转移酶，其基因核苷酸序列为SEQ ID NO：1。

2.如权利要求1所述的菊糖果糖转移酶，其氨基酸序列为SEQ ID NO：2。

3.权利要求1所述的菊糖果糖转移酶基因序列，进行克隆，构建高表达重组大肠杆菌BL21-IFT的方法，其特征在于：由产菊糖果糖转移酶活性高的菌种SK8.001的DNA为模板，采用

引物P1：CGCGCATATGGGAATTGATAAGACGCT

和引物P2：GATAAAGCTTGGGCGTGGGCCGAATGG

经PCR扩增，得到完整的菊糖果糖转移酶基因的DNA片段；该基因DNA片段与pET22b(+)质粒，分别都用Nde I和Hind III酶切；再将酶切的pET22b(+)质粒和菊糖果糖转移酶基因DNA片段，用T4DNA连接酶连接获得重组质粒pET22b(+)-ift，再转化至感受态大肠杆菌BL21中，构建得高表达的重组大肠杆菌BL21-IFT。

4.权利要求2所述菊糖果糖转移酶的诱导表达方法，其特征在于步骤如下：

利用权利要求3所获得的重组大肠杆菌BL21-IFT在含氨苄青霉素的LB培养基中活化，再接种于新鲜的含氨苄青霉素的LB培养基中，培养至OD₆₀₀为0.4-1.2时，加入诱导剂、表面活性剂诱导表达数小时；

所述诱导剂其中至少一种选自异丙基-β-D-硫代半乳糖苷IPTG、半乳糖、乳糖；其中IPTG诱导浓度0.1-5.0mM，乳糖诱导浓度0.1-100g/L，半乳糖诱导浓度0.1-100g/L；

所述表面活性剂其中至少一种选自Tween 80、Triton X-100、十六烷基三甲基溴化胺CTAB、十二烷基硫酸钠SDS，其诱导浓度均为0.1-100mM；

诱导表达温度为20-40℃。