[发明专利]一种莱克多巴胺仿生抗体的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及高分子材料技术领域，尤其涉及一种莱克多巴胺仿生抗体的制备方法。

背景技术

莱克多巴胺(RAC)·盐酸(Ractopamine hydrochloride)是一种苯酚胺类β₂-肾上腺素激动剂，具有营养再分配作用，增强脂肪分解代谢，促进蛋白质合成，可明显提高瘦肉率，提高饲料转化率的作用。但是当人体中累计摄入剂量超过一定值时，易出现毒副反应。目前除了美国批准其可为猪的饲料添加剂外，欧盟、日本等许多国家都将其列为违禁药物，禁止在畜禽生产上使用。我国农业部2002年3月农牧发[2002]1号文“关于发布《食品动物禁用的兽药及其化合物清单》的通知”中明确规定禁止使用RAC，农业部、卫生部、国家药品监督管理局2002年第176号公告也明令禁止在饲料和动物饮用水中使用RAC。虽然世界各国相继禁止使用克仑特罗作为饲料添加剂，但RAC的非法添加仍日趋严重。与克仑特罗等其它β-激动剂相比，RAC检测方法较滞后。目前国内外在检测食品中RAC的方法有仪器分析方法如波谱法、色谱法及其连用技术；免疫分析方法：放射免疫测定法、酶联免疫测定法、荧光免疫测定法和免疫传感器法等；生物测定法：微生物学测定法(敏感菌抑制法)、放射受体测定法等。其中仪器分析方法准确性和敏感性较高，但仪器比较昂贵，检测费时且成本高；免疫分析方法具有高效、快速、低成本的特点和一次检测样品量大的特点，但出现假阳性的概率较大，易引起误判。

在RAC的免疫分析方法中，由于RAC是小分子化合物，其本身不能使动物产生抗体，需与适当载体蛋白质偶联才能诱导免疫动物产生相应抗体，因此，制备质量稳定的农药抗体具有相当的难度，从而限制了免疫分析法的应用范围。免疫分析中生物抗体对外界环境较为敏感，容易失活，纯化条件苛刻而限制其广泛应用。

分子印迹技术是当前发展高选择性材料的主要方法之一，是模拟抗体抗原相互作用的具有特异选择性识别位点性质的技术，它利用化学手段合成一种高分子聚合物——分子印迹聚合物(molecularly imprinting polymer，MIP)。MIP能够特异性吸附作为印迹分子的待测物，在免疫分析中可以取代生物抗体，为克服上述生物抗体的局限性提供了强有力的工具。分子印迹聚合物具有良好的物理、化学性能以及接近或达到天然抗体对抗原的高度亲和性和专一性，其特异性结合反应与免疫分析的抗原-抗体结合有许多相似之处。将免疫分析理论和方法移植于模板分子与分子印迹聚合物的特异性识别反应，建立以模板分子与印迹聚合物特异性识别反应为基础的分子印迹免疫吸附检测技术，具有较大的发展和应用空间。

发明内容

本发明的目的在于提供一种采用分子印迹技术与有机无机杂化法相结合的方法、合成对莱克多巴胺有高选择性的仿生抗体的方法，本发明的技术方案是：

(1)在甲醇和甲苯的混合溶剂中加入莱克多巴胺，甲基丙烯酸，超声波脱气5min后，40℃水浴搅拌反应2h，再加入γ-甲基丙烯酰氧丙基三甲氧基硅烷和偶氮二异丁腈，然后用8道微量可调移液器将所合成聚合物移到96孔酶标板中，在紫外灯下孵化12h；

(2)将上述的聚合产物用甲醇与冰乙酸作为萃取剂，超声波连续萃取48h，然后用甲醇作为萃取剂，超声波萃取12h，然后在40℃温度条件下干燥10～12h，即得莱克多巴胺仿生抗体；

本发明的优点和积极效果是：

(1)本发明提供的莱克多巴胺仿生抗体以莱克多巴胺为模板分子合成，专一识别莱克多巴胺，具有非常高的选择性；该仿生抗体用化学合成方法制备，有较高的稳定性、较长的使用寿命和较强的抗恶劣环境能力。

(2)本发明聚合反应的仿生抗体以膜的形式分布于96孔酶标板表面，印迹位点分布于分子印迹膜表面，使得模板分子容易洗脱，且传质速度快。

(3)本发明成本低廉，实验操作简单，反应条件容易控制，制得的莱克多巴胺分子印迹膜作为仿生抗体用于莱克多巴胺酶联免疫分析，适用于各种动物源性食品中痕量莱克多巴胺检测。

具体实施方式

下面结合实施例，对本发明进一步说明；下述实施例是说明性的，不是限定性的，不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。

本发明是将分子印迹技术与有机无机杂化法相结合，在96孔酶标板上合成对莱克多巴胺具有高选择性吸附功能的仿生抗体，其具体实施例为：