[发明专利]用于临床检测髓过氧化物酶的试剂盒及其方法

说明书

技术领域

本发明属生物化学、检验试剂技术领域，具体涉及一种用于临床检测髓过氧化物酶(MPO)的试剂盒及其方法。

背景技术

髓过氧化物酶(英文名：Myeloperoxidase，英文缩写：MPO，EC：1.11.1.7)主要是由活化的多形核嗜中性粒细胞分泌的糖基化的血红蛋白，是一种过氧化物酶。MPO颜色为绿色，分子量140kDa，为两个相同单体构成的二聚体，两单体分开后仍有酶的活性。

研究证实：MPO是一种白细胞酶，有促炎、促动脉粥样硬化的作用，影响粥样斑块的稳定性，并通过增大氧化应激而引起急性冠状动脉粥样硬化综合征(ACS)。作为活化粒细胞的标志物，MPO是ACS危险性分层的良好指标；MPO在慢性肾炎、肾功能不全者和2型糖尿病等方面也有着重要的检测价值。

目前，测定髓过氧化物酶(MPO)的市售试剂盒有两种：一种是ELISA法(酶联免疫吸附测定法)试剂盒，在市场上占主导地位；另一种是次氯酸法试剂盒，利用以下反应测定MPO的氯化活性

以上两种试剂盒都是手工法，手工操作准确度有限，且检测周期长、需要样本量大，不能运用于全自动生化分析仪等缺点，且占主导地位的ELISA法更有价格昂贵、试剂盒制备工艺复杂、难以工业化生产等缺点，给临床诊断带来很大的不便。因此有必要研究一种价格合适、样本需要量小、适合于全自动生化分析仪运行的试剂盒，克服上述缺点。

发明内容

本发明针对现有技术的上述不足，提供一种临床应用方便、检测成本低、需要样本量少、测定准确度高、可以直接应用于全自动生化分析仪的髓过氧化物酶(MPO)试剂盒。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案为：一种用于临床检测髓过氧化物酶的试剂盒，该试剂盒由以下三种试剂构成，其中：

试剂1：

缓冲液                    20～200mmol/L

色原                      0.1～5mmol/L

稳定剂                    1～100g/L

防腐剂                    0.1～100g/L

表面活性剂                1～100ml/L

盐酸                      2～20ml/L；

试剂2：

缓冲液                    20～200mmol/L

H₂O₂                      0.1～100mmol/L

4-氨基安替比林            0.1～100mmol/L

稳定剂                    1～100g/L

防腐剂                    0.1～100g/L

表面活性剂                1～100ml/L

盐酸                      2～20ml/L；

试剂3：

髓过氧化物酶抑制剂        20～100μmol/L

稳定剂                    1～100g/L

防腐剂                    0.1～100g/L

表面活性剂                1～100ml/L。

本发明上述的缓冲液为磷酸盐缓冲液(如磷酸钾缓冲液)、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸缓冲液、GOOD‘S缓冲液中的一种。

本发明上述试剂1中的色原为Trinder反应505nm有吸收的色原，如苯酚、愈创木酚或3，5-二氯-2-羟基苯磺酸钠(DHBS)等。

本发明上述的稳定剂为多元醇、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白(BSA)、甘露醇、二糖及多糖。其中多元醇为甘油、乙二醇、PEG 2000(PEG为聚乙二醇)或者PEG 6000；其中二糖及多糖为蔗糖、麦芽糖、可溶性淀粉。

本发明上述的防腐剂为2-甲基异噻唑酮盐酸(2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮盐酸盐CAS：26172-54-3，MIT)、叠氮化合物(如叠氮钠)、PC系列防腐剂(如PC300)。

本发明上述表面活性剂为非离子型表面活性剂，如吐温80(Tween 80)、曲拉通X-100(Triton X-100，聚乙二醇辛基苯基醚)或乳化剂OP。

本发明上述试剂3中的MPO抑制剂为本发明的关键所在，该抑制剂必须具有以下特性：