[发明专利]一种靶向肿瘤细胞的磷光铱配合物

说明书

技术领域

本发明属于肿瘤靶向显像剂技术领域，具体涉及一种能靶向整合素α_vβ₃表达的肿瘤细胞的磷光铱配合物，该磷光铱配合物作为磷光显像剂对整合素α_vβ₃表达的肿瘤细胞进行靶向识别和成像。

背景技术

肿瘤显像技术对于肿瘤的早期诊断与鉴别诊断、临床分期与治疗有着重要的意义。随着生长抑素受体显像剂已批准应用于临床，肿瘤受体显像正越来越受到重视。整合素α_vβ₃在多种肿瘤细胞表面和新生血管内皮细胞上有高表达，但在成熟血管内皮细胞和绝大多数正常器官系统中α_vβ₃不表达或者很少量的表达，成为肿瘤治疗的新靶点。整合素α_vβ₃与RGD肽有特异性作用，使得含RGD肽的靶向显像研究受到人们的广泛关注。

RGD肽是一类含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp)的短肽，广泛存在于生物体内，其中细胞外基质(ECM)和血液中的粘附蛋白是人体中最常见的含RGD序列的蛋白。其受体整和素家族是由α亚基和β亚基以非共价结合的方式形成的异二聚体，迄今已发现二十余种整和素受体形式，其中，α_vβ₃、α_vβ₅、α_vβ₁与RGD序列的关系最密切。但是RGD三肽序列在体内易被酶解，半衰期短，不便直接应用于临床，故提高RGD肽与整和素的亲和性及其在体内的稳定性和延长其作用时间的研究倍受重视。现已证实，环化肽具有更稳定的结构和更强的亲和性。目前文献报道的环化肽主要有五环肽c(RGDFK)，c(RGDYK)和c(CRGDC)。

荧光成像技术在敏感的肿瘤诊断尤其是在肿瘤的早期诊断阶段有着巨大潜力，这是一项灵敏的、非侵入性、非电离性、临床应用安全、费用相对低廉的技术。为此研究人员不断致力于新的荧光成像技术和荧光探针的开发和研究。近年来，以磷光重金属配合物为探针引起了人们的很大兴趣，与有机磷光材料相比，磷光重金属配合物具有较大的Stokes位移和较长的发射寿命，长的发射寿命有利于使用时间分辨技术使磷光信号与背景信号相区分。但到目前为止，只有少数铱配合物被用作细胞染色(Mengxiao Yu，Fuyou Li，et al.，Chem.Commun.2008，2115-2117)，还没有关于靶向成像肿瘤细胞的铱配合物报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD肽)连接的铱配合物，它具有靶向整合素α_vβ₃表达的肿瘤细胞的能力，可作为肿瘤靶向显像剂。

本发明提出的靶向成像整合素α_vβ₃表达的肿瘤细胞的磷光显像剂是指配体含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD肽)的铱配合物，具体的结构式为：

铱配合物的制备：铱二氯桥配合物(pq)₂Ir(μ-Cl)₂Ir(pq)₂(pq为2-苯基喹啉)按文献制备(参见文献Nonoyama，K.Bull.Chem.Soc.Jpn.1974，47，467-468.)。称取摩尔比为1∶4的铱二氯桥配合物和RGD肽配体加入到双颈瓶中，在氮气或氩气保护下，用注射器注入2-乙氧基乙醇和水的混合物，二者体积比为1～5，最佳体积比为3∶1，然后将反应混合物加热至110℃，搅拌反应1～24小时，有沉淀生成。反应停止后将反应混合物降至室温，将沉淀过滤，收集滤液。滤液使用CombiFlash反相液相色谱(C18，40g)纯化，得黄色固体。

该铱配合物的RGD肽配体能与U87MG肿瘤细胞表面过表达的整合素α_vβ₃受体特异性结合，借助这些受体介导的内吞作用，将铱配合物靶向转运到肿瘤细胞内，观察到铱配合物的强红色磷光，而在MCF-7肿瘤细胞中，整合素α_vβ₃受体低表达，只观察微弱的红色磷光。

配合物对U87MG细胞和MCF-7细胞的成像实验：细胞实验是在DMSO(二甲亚砜)和MEM细胞培养基(改良的Eagle培养基)的缓冲溶液中进行的。配合物溶于DMSO和MEM细胞培养基的缓冲溶液中，分别加入到U87MG细胞和MCF-7细胞中孵育相同时间后，再在共聚焦显微镜下观察。