[发明专利]一种用于检测单核细胞吞噬能力的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于检测单核细胞吞噬能力的试剂盒。

背景技术

我国每年因重大动物疾病造成的直接经济损失达到了300多亿元人民币，重大动物疾病给畜牧生产带来了严重影响。动物抗病育种研究进展缓慢，易感个体数量增加，重大传染性疾病时有发生。特别是人畜共患病(如禽流感等)的出现，给人类的社会生活也造成了巨大影响。

单核细胞是动物外周血中的一类多能干细胞。单核细胞核大，常呈肾形或马蹄形，胞质丰富，在瑞氏染色血涂片中，胞质为极弱嗜碱性，呈浅灰蓝色，细胞形状不一，有圆形，多角形等。单核细胞具有趋化作用和吞噬作用，可以吞噬、消化与消灭侵入机体的病原体，也可以将特异性抗原呈递给T细胞引发体液免疫。同时单核细胞还具有其他功能：识别和清除变性的血浆蛋白、脂类等大分子物质；识别和杀伤肿瘤细胞；清除衰老与损伤的细胞和细胞碎片；在吞噬衰老的红细胞和溶血时逸出的血红蛋白后，参与铁和胆色素代谢；参与调节粒系造血祖细胞的增殖和分化。动物外周血中的单核细胞在特异性免疫与非特异性免疫中发挥着重要作用，既具有吞噬、消化与消灭侵入机体的病原体的功能，又具有将特异性抗原呈递给T细胞引发体液免疫的双重功能。单核细胞吞噬能力具有良好的遗传基础、在品种间差异较大、且经过几代选育能够稳定遗传，因此可以作为一个重要的标记用于动物的抗病育种。

现有技术已经能够从外周血液中快速分离单核细胞以及单核细胞的鉴定，且充分证明了单核细胞吞噬特性同动物机体的抗病能力、病原体清除能力，以及攻毒后抗体产生水平有着显著的相关性，可以很好地反映机体的免疫能力。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种用于检测单核细胞吞噬能力的试剂盒。

本发明所提供的用于检测单核细胞吞噬能力的试剂盒，包括经染料染色的肿瘤细胞。

经染料染色的肿瘤细胞在制备用于检测单核细胞吞噬能力的试剂盒中的应用也属于本发明的保护范围。

上述试剂盒或上述应用中，所述试剂盒包括细胞储存液，所述经染料染色的肿瘤细胞混合于所述细胞储存液中；所述细胞储存液组成：由磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钠和水组成，磷酸二氢钠在所述细胞储存液中的浓度为1.14g/L，磷酸氢二钠在所述细胞储存液中的浓度为0.2g/L，氯化钠在所述细胞储存液中的浓度为8g/L。

上述试剂盒或上述应用中，所述试剂盒包括单核细胞培养液和二甲基亚砜；所述单核细胞培养液为添加胎牛血清的RPMI-1640培养基，胎牛血清在所述单核细胞培养液中的浓度为10％(体积百分含量)。

上述试剂盒或上述应用中，所述试剂盒由所述经染料染色的肿瘤细胞、所述细胞储存液、单核细胞培养液和二甲基亚砜组成；所述经染料染色的肿瘤细胞混合于所述细胞储存液中。

上述试剂盒或上述应用中，所述试剂盒中，所述染料染色的肿瘤细胞在所述细胞储存液中的浓度为1000个细胞/ml、2000个细胞/ml、4000个细胞/ml、6000个细胞/ml、8000个细胞/ml、10000个细胞/ml或12000个细胞/ml。

上述试剂盒或上述应用中，所述经染料染色的肿瘤细胞是按照包括如下步骤的方法制备得到的：将所述肿瘤细胞预培养，得到预培养后的肿瘤细胞，将所述预培养后的肿瘤细胞与染料溶液混合，培养10h-12h，得到经染料染色的肿瘤细胞。此过程中，一般培养10h后贴壁细胞容易被移液枪吹起。

上述试剂盒或上述应用中，所述预培养的方法包括如下步骤：将所述肿瘤细胞以10⁶个/ml密度接种于肿瘤细胞培养基中，置于37℃、5％CO₂的二氧化碳培养箱中培养，至所述肿瘤细胞汇合至60％-70％，得到所述预培养后的肿瘤细胞；

所述将所述预培养后的肿瘤细胞与染料溶液混合，培养12小时中，所述培养的方式为37℃、5％CO₂的二氧化碳培养箱中培养。

上述试剂盒或上述应用中，所述肿瘤细胞为结直肠癌HCT-8细胞或293T细胞；

上述试剂盒或上述应用中，所述染料为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐或荧光染料；所述荧光染料为PI、DAPI、Hoechst 33342、Hoechst 33258、EB、cy3或cy5；

所述染料溶液由3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐和水组成3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐在染料溶液中的浓度0.5％(质量百分比)。