[发明专利]一种复合型肝脏内定向基因转移载体构建方法无效
| 申请号： | 201010234139.4 | 申请日： | 2010-07-23 |
| 公开（公告）号： | CN101921807A | 公开（公告）日： | 2010-12-22 |
| 发明（设计）人： | 何勇;周峻;窦科峰;李海民;陈勇;王德盛;岳树强;赵威;周景师;曹大勇 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第四军医大学 |
| 主分类号： | C12N15/861 | 分类号： | C12N15/861;C12N15/88 |
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| 地址： | 710032 陕西省*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 复合型 肝脏 定向 基因 转移 载体 构建 方法 | ||
1.一种复合型肝脏内定向基因转移载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤Al，腺病毒HGF，asTGF β1载体构建；A2，甲壳糖包裹pAdV.CMV-HGF-asTGFβ1纳米微囊病毒载体复合体构建；A3，纳米微囊-pAdV.CMV-HGF-asTGFβ1复合体外包被去唾液酸糖蛋白AsOR。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤A1具体执行以下操作：采用腺病毒质粒，pAd.CMV及目标基因质粒PCL-HGF，PCBL-asTGFβ1，经酶切连接，重组构建pAd.CMV-HGF-asTGFβ1腺病毒LacZ，Luciferase gene转染载体；经转染大肠杆菌，扩增，提取；所得部分pAd.CMV-HGF-asTGFβ1质粒，与含白蛋白启动子和增强子的缺陷型pJM17重组，产生完整的病毒基因组DNA，转染293细胞，进行AdV病毒包装后，提取pAdV.CMV-HGF-asTGFβ1。
3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤A2具体执行以下操作：0.02％甲壳糖，NaAcHoAc液+pAdV.CMV-HGF-asTGFβ1，1ug/ml PSS溶液，混匀后加入NHS-PEG-MAL，MW2000，SSA-PEG MW5000及PBS溶液进行衍生化反应，加氨酸终止反应，再加巯基化转铁蛋白，室温下形成纳米微囊pAdV.CMV-HGF-asTGFβ1混悬液，进行超速离心提取、冻干提纯纳米微囊病毒载体复合体；所得纳米微囊pAdV.CMV-HGF-asTGFβ1复合体，经PBS液稀释；Pincocreen法测定其DNA包载量；激光散射法测定其直径、大小后，待用。
4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤A3具体执行以下操作：从猪血清中提取AsOR，再AsOR与Poly-L-lysine混合，利用复合纳米微囊壁所含的转铁蛋白，将AsOR-PL与转铁蛋白按Wangner氏法交联，经纯化获得AsOR-PL-Nanosphere-pAdV.CMV-HGF-asTGFβ1复合体。
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