[发明专利]β-兴奋剂沙丁胺醇、盐酸克伦特罗二元检测测试条及其制备方法

权利要求书

1.一种β-兴奋剂沙丁胺醇、盐酸克伦特罗二元检测测试条，包括基材PVC板和覆膜，其特征在于，基材PVC板(1)上面自前向后依次设置有引水玻璃纤维(3)、载体玻璃纤维(4)、硝酸纤维膜(2)和吸水棉浆板(5)，引水玻璃纤维(3)、载体玻璃纤维(4)和吸水棉浆板(5)上面覆盖有由前部覆盖膜(7)和后部覆盖膜(6)组成的覆膜，测试条前部载体玻璃纤维上吸附有抗沙丁胺醇蛋白质偶联物、抗盐酸克伦特罗蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物；中部硝酸纤维膜上自后而前分布有一条包被有兔抗鼠多抗的质控线，二条分别包被有沙丁胺醇蛋白质偶联物、盐酸克伦特罗蛋白质偶联物的检测线，硝酸纤维膜两端分别与载体玻璃纤维后端面和吸水棉浆板前端面紧密接触，载体玻璃纤维前端面和引水玻璃纤维后端面紧密接触。

2.根据权利要求1所述的β-兴奋剂沙丁胺醇、盐酸克伦特罗二元检测测试条，其特征在于，所说的覆膜为不干胶膜。

3.权利要求1所述的β-兴奋剂沙丁胺醇、盐酸克伦特罗二元检测测试条的制备方法，其特征在于，由以下步骤实现：

(1)、胶体金标记单克隆抗体的制备：取1份含有抗沙丁胺醇蛋白质偶联物或抗盐酸克伦特罗蛋白质偶联物单克隆抗体的小鼠腹水与2份60mM醋酸缓冲液混合，18-25℃搅拌下逐滴加入辛酸33μl/ml小鼠腹水，混匀后，18-25℃放置30分钟，15000转/分、4℃离心20分钟，用玻璃棉过滤上清液，弃沉淀物，过滤后的上清液用NaOH调PH值至7.2，再加入硫酸铵，硫酸铵加入量为每1ml PH值7.2的上清液中加入硫酸铵0.277g，快速使硫酸铵溶解，18-25℃搅拌30分钟，15000转/分、4℃离心20分钟，弃上清液，沉淀物用原小鼠腹水1/2体积的0.01M PBS pH 7.2溶液溶解，再放入0.01M PBS pH 7.2溶液中浸没，4℃透析48小时，用紫外分光光度计测定蛋白含量，即制备成胶体金标记用的抗盐酸克伦特罗蛋白质偶联物单克隆抗体、抗沙丁胺醇蛋白质偶联物单克隆抗体；所说的小鼠腹水，其制备方法是，将液体石蜡注射7周龄Balb/c小鼠腹腔内，注射量为500μl/只，10天后，将分泌抗盐酸克伦特罗蛋白质偶联物或抗沙丁胺醇蛋白质偶联物单克隆抗体的杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔内，注射杂交瘤细胞的数量为2×10⁶/只鼠，10天后用无菌注射器注射于小鼠腹腔采集腹水，即为抗盐酸克伦特罗蛋白质偶联物或抗沙丁胺醇蛋白质偶联物单克隆抗体的小鼠腹水；

(2)、制备胶体金溶液：在烧杯中加入1000ml蒸馏水，100℃煮沸5分钟，再加入质量浓度为1％的氯金酸溶液10ml和质量浓度为1％的柠檬酸三钠溶液15～20ml，搅拌至溶液呈深红色，冷至18-25℃，用碳酸钾调PH值至待标记单克隆抗体的等电点或略偏碱，即为待标记的胶体金溶液；

(3)、胶体金标记物的制备：取100ml步骤2中调好PH的胶体金溶液，加入抗盐酸克伦特罗蛋白质偶联物单克隆抗体或抗沙丁胺醇蛋白质偶联物单克隆抗体1～10μg/ml胶体金溶液，搅拌2分钟，加入质量浓度为10％的牛血清白蛋白15μl/ml胶体金溶液终止反应，离心50分钟，得沉淀物，沉淀物用PH为7.4的0.01M PBS稀释至步骤2的原胶体金溶液体积的30％，制备成抗盐酸克伦特罗蛋白质偶联物单克隆抗体或抗沙丁胺醇蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物；

(4)、固化金标物的制备：用载体玻璃纤维吸取抗盐酸克伦特罗蛋白质偶联物单克隆抗体或抗沙丁胺醇蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物，干燥，制备成抗盐酸克伦特罗蛋白质偶联物单克隆抗体或抗沙丁胺醇蛋白质偶联物单克隆抗体固化金标物；

(5)、包被膜制备：取兔抗鼠多抗、沙丁胺醇蛋白质偶联物、盐酸克伦特罗蛋白质偶联物，分别包被于硝酸纤维膜上，制备成包被膜；兔抗鼠多抗包被浓度为0.5～5mg/ml，盐酸克伦特罗蛋白质偶联物、沙丁胺醇蛋白质偶联物包被浓度为0.05～2mg/ml；

(6)、测试条装备：取基材PVC板(1)，将引水玻璃纤维(3)、固化金标物的载体玻璃纤维(4)、构成包被膜的硝酸纤维膜(2)、吸水棉浆板(5)自前向后依次粘贴于基材PVC板(1)上，覆盖上由前部覆盖膜(7)和后部覆盖膜(6)组成的覆膜，切割成长条即可。