[发明专利]用于样品中苹果源性成分检测的引物及方法和试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体而言，本发明涉及用于样品中苹果源性成分检测的寡核苷酸引物，用于测定样品中苹果源性成分的实时荧光PCR检测方法，用于快速检测样品中苹果源性成分的PCR检测试剂盒，以及样品中苹果源性成分的特异性寡核苷酸引物和探针在检测样品中苹果源性成分中的应用。

背景技术

中国是世界最大的苹果栽培国，也是苹果汁生产和出口大国。苹果汁作为仅次于橙汁的世界第二大果汁饮料，是目前全球消费量增长最快的果汁之一。近年来，随着人民生活水平的提高，我国苹果汁的销量不断增长，品种和类型不断增多，品牌五花八门。但是，受经济利益的驱使，一些不法厂商在果汁成分及含量标示上弄虚作假，假冒伪劣产品充斥市场。如在1995年，由于国际市场上苹果汁的短缺，苹果汁价格在高位波动，而梨汁甚至糖浆等价格较低，因此掺入梨汁甚至糖浆等的苹果汁充斥市场。这不仅直接损害了消费者的经济利益，而且极有可能危害消费者健康，同时也侵犯了商标持有企业的合法权益，最终不仅破坏我国市场经济秩序，扰乱社会诚信体系，而且影响我国商品在国际市场上的形象，损害我国进出口贸易利益。

此外，随着人们生活方式的改变，我国食品过敏的发病率日渐增高，食品过敏的受重视程度越来越高，对各类食源性过敏源的检测也显得越来越重要。类甜蛋白Thaumatin-Like Protein(TLP)作为其中一种重要的过敏源，逐渐受到越来越多的关注。TLP目前已从多种食物中提取出来，如梨、苹果、桃、小麦、番茄和马铃薯等，它是植物在受到病原微生物侵害时体内诱导产生的病程相关蛋白(PRs)家族的重要成员之一，参与多种真菌抗性反应过程，还是部分人群的重要过敏原。目前市场上苹果汁饮料中的类甜蛋白成分可能因为标识不清或掺伪造假，造成部分人群对其过敏而侵犯消费者权利。因此，果汁饮料中的过敏源成分类甜蛋白检测具有理论和现实意义。

目前苹果汁掺假方式主要有两种：第一种是在苹果汁中掺入一些价格更廉的果汁，比如白葡萄汁或者梨汁；第二种是向苹果汁中加入水和糖浆等成分，增加其体积。而现有的苹果汁真伪鉴别方法有：糖类辨别法、有机酸辨别法、果胶物质鉴定法、酚类物质鉴定法、酮类物质鉴定法、氨基酸鉴别法、无机元素辨别法等特定成分辨别法以及高效液相色谱技术、气相色谱、稳定性同位素质谱法、MALDI-TOMS法、热裂解质谱法、近红外光谱技术、紫外光谱技术、人工神经网络等仪器分析法等。上述这些方法的应用，对果汁市场的监督与管理起到了一定的作用。但是，上述技术很大程度上会受到品种、产地、收获季节、原料环境、加工条件、贮运包装方式等很多因素的影响，具有一定的局限性。另外，影响理化或仪器鉴伪技术取样代表性的因素非常多，要保证其方法的可靠性，就需要大量的检测样本和科学的数理模型分析技术，使得上述方法在实际应用上受到很大的限制。

国际苹果汁加工业中深加工产品越来越多、新技术层出不穷，而我国苹果加工业还存在着原料不足、农残超标等尚需解决的问题，苹果汁掺伪鉴别方法也是影响我国苹果汁行业健康发展的制约因素之一。当前，急需一种能不受添加手段影响，从果汁原料本质上予以检测的鉴伪技术。随着现代生物技术的发展，分子生物学方法进行食品鉴别正成为国际上倍受关注的研究方向。分子生物学技术以其方便、准确、迅速、简洁的特点，从基因水平分析食品原料和产品的特性和来源，灵敏度更高、特异性更强，其结果为证明食品的真伪提供了真实、可靠的依据，近年来逐渐用于食品种类鉴别、产品溯源等的鉴伪。

目前，国内外尚未见报道能够快速、简单、特异且灵敏地检测果汁、食品、药品以及营养品等样品中苹果源性成分的方法以及试剂盒。

因此，本领域需要一种快速、特异性好、灵敏度高的样品中苹果源性成分的检测方法以及用于快速检测样品中苹果源性成分的试剂盒，进行果汁、食品、药品以及营养品等样品中苹果源性成分的检测。

发明内容

本发明的一个目的在于，提供快速检测样品中苹果源性成分的特异性寡核苷酸引物。

本发明的另一个目的在于，提供快速测定样品中苹果源性成分的PCR检测方法。

本发明的再一个目的在于，提供用于快速检测样品中苹果源性成分的PCR检测试剂盒。

本发明的还一个目的在于，提供样品中苹果源性成分的特异性寡核苷酸引物和探针在检测样品中苹果源性成分中的应用。

针对上述发明目的，本发明提供以下技术方案：