[发明专利]提高小麦纹枯病抗性的方法

权利要求书

1.一种提高小麦纹枯病抗性的方法，是通过PCR方法由拟南芥基因组DNA克隆出拟南芥NPR1基因，其特征在于：

a)利用一对引物SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3通过PCR方法由拟南芥基因组DNA克隆出拟南芥NPR1基因的克隆片段SEQ ID NO：1，并构建拟南芥NPR1基因的表达载体；

b)通过基因枪法将拟南芥NPR1基因的表达载体导入受体小麦幼胚细胞；对所述的小麦幼胚细胞进行愈伤诱导、植株再生，获得转基因待选植株；

c)对转基因待选植株进行分子检测，获得阳性转基因植株；

d)阳性转基因植株通过自交和PCR筛选，获得T₂代转基因纯合株系；

e)对T₂代转基因纯合株系后代进行纹枯病抗性筛选，获得纹枯病抗性提高的转基因植株。

2.根据权利要求1所述的提高小麦纹枯病抗性的方法，其特征在于：构建拟南芥NPR1基因的表达载体是指：将上、下游分别附加限制性内切酶SmaI和SacI酶切识别DNA序列的克隆片段SEQ ID NO：1采用SmaI和SacI酶切后，回收2010bp片段；以pAHC25为基础质粒，采用限制性内切酶SmaI和SacI对pAHC25质粒DNA进行酶切，回收7.8Kb左右DNA酶切大片段，以T₄DNA连接酶与回收的附加SmaI和SacI酶切位点的SEQ ID NO：1的2010bp片段连接，转化大肠杆菌，对抗100mg/L氨苄青霉素的阳性克隆进行扩增并提取质粒，采用测序和酶切的方法验证连接的正确性，获得的质粒命名为pAC-NPR1即为拟南芥NPR1基因的表达载体。

3.根据权利要求1所述的提高小麦纹枯病抗性的方法，其特征在于：对转基因待选植株进行分子检测，获得阳性转基因植株是指：对待选植株通过一对引物SEQ IDNO：4和SEQ ID NO：5进行PCR筛选获得大小为745bp的扩增片段，通过另一对引物SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：7进行PCR筛选获得大小为721bp的扩增片段，对所述的两个扩增片段通过电泳图检测，同时含有拟南芥NPR1基因的这两条扩增片段的植株被确定为阳性转基因植株。

4.根据权利要求1所述的提高小麦纹枯病抗性的方法，其特征在于：对T₂代转基因纯合株系后代进行纹枯病抗性筛选是指：在小麦拔节期对被测后代采用牙签接菌法接种纹枯病致病菌株R46，于小麦乳熟期调查纹枯病发病情况，计算株系平均病情指数，根据病情指数判定小麦植株的纹枯病抗性。