[发明专利]以磁性微粒为固相载体检测总甲状腺素的试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及临床免疫检测技术，尤其是涉及一种以磁性微粒为固相载体检测总甲状腺素的试剂盒，本发明还涉及该试剂盒的制备方法。

背景技术

甲状腺素(T4)是由甲状腺滤泡上皮细胞合成和分泌的甲状腺激素，其结构由一个酪氨酸残基和一个酚环组成，与T3的区别仅在于多一个碘原子。正常人平均每日的T4分泌量为90±9μg，约为甲状腺内贮存量的1％。T4进入血液循环后约99.96％与结合蛋白结合，其中约60％与甲状腺结合球蛋白(TBG)结合，30％与甲状腺结合前白蛋白(TBPA)结合，其余与白蛋白结合。结合T4与游离T4之间呈可逆的平衡状态。结合状态的甲状腺素不能发挥其生理功能，而只有游离T4方能进入靶细胞与T4受体结合并发挥其生理功能。甲状腺外T4的循环总量为900μg，半衰期为7天。T4是具有生物活性的甲状腺激素，能促进糖、脂肪、蛋白质代谢，产生能量和热，并促进生长发育。近年来有人认为T4是T3的前激素，是其储备形式。血清中总的T4称为总T4(TT4)，游离部分的T4称为游离T4(FT4)。

甲状腺疾病会引起血清TT4的变化。甲状腺机能亢进时，包括原发性，二发性，三发性甲亢，以及高功能腺瘤、自主功能结节、T4型甲亢等，均有甲状腺合成和分泌T4增多，导致血清TT4增高。而亚急性甲状腺炎和慢性淋巴细胞性甲状腺炎的早期，因甲状腺滤泡受破坏，T4溢出，使血中TT4一过性升高产生暂时性的轻度甲亢。大量服用甲状腺素，或误食动物甲状腺，致使血中TT4增高，可产生医源性或中毒性甲亢，甚至甲亢危象。当靶组织对甲状腺激素不敏感时，虽然机体无甲亢症状，但外周血T4增高；若是下丘脑，垂体对甲状腺激素不敏感，则外周血T4增高，并有甲亢症状，且促甲状腺激素(TSH)亦增高。

甲状腺机能减退时，无论是原发，继发或其它原因，TT4均减低。且T4的降低先于T3的降低，因此，测定T4(配合TSH的测定)能较好地及早发现甲低病人。

正确检测总甲状腺素水平，对甲状腺疾病的诊断、疗效判断及帮助医生排除非甲状腺疾病均有重要意义。目前，临床检测总甲状腺素的试剂多采用放射免疫分析法和酶联免疫分析法，这两种方法中，前者操作繁琐、耗时，试剂存在放射性污染，且因放射性元素天然存在的半衰期，试剂有效期一般较短，仅能维持1-3个月；后者线性范围较窄，灵敏度较低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种以磁性微粒为固相载体检测总甲状腺素的试剂盒，该试剂盒反应快速，检测灵敏度高且准确；本发明还涉及该试剂盒的制备方法。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的以磁性微粒为固相载体检测总甲状腺素的试剂盒，它包括偶联有抗甲状腺素抗体的磁微粒混悬液、甲状腺素系列校准品、辣根过氧化物酶标记的甲状腺素溶液、发光底物A液和发光底物B液以及浓缩洗液。

所述抗甲状腺素抗体为鼠抗甲状腺素单克隆抗体。

所述的甲状腺素系列校准品以去甲状腺素血清或分析缓冲液为校准品基质，加入甲状腺素纯品配制而成。

所述辣根过氧化物酶标记的甲状腺素溶液是将甲状腺素与辣根过氧化物酶共价偶联在一起，制备成辣根过氧化物酶标记的甲状腺素，使用时用缓冲液稀释至工作浓度即可。

所述发光底物A液由luminol 0.15mM、羟基香豆素0.59mM、没食子酸0.35mM、pH 9.4的Tris-Hcl缓冲液0.2M组成；所述发光底物B液由氨基酸氧化酶0.85mM、吐温-200.8％v/v、二乙烯三胺五乙酸0.5mM、维生素C 0.12mM、pH 6.5的乙酸-乙酸盐缓冲液0.2M组成。

所述的浓缩洗液由0.1M磷酸盐缓冲液和1％Tween-20组成。

本发明所述的以磁性微粒为固相载体检测总甲状腺素的试剂盒的制备方法，包括下述步骤：

第一步，偶联有抗甲状腺素抗体的磁微粒混悬液的制备