[发明专利]一种检测己烯雌酚的方法及其专用化学发光免疫试剂盒

权利要求书

1.一种检测己烯雌酚的化学发光免疫试剂盒，包括己烯雌酚特异性抗体、包被原和标准品溶液；所述包被原为己烯雌酚半抗原与载体蛋白的偶联物，其结构式如式I所示：

2.根据权利要求1所述的化学发光免疫试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括发光液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液、包被缓冲液、封闭液和酶标抗抗体；

所述试剂盒由己烯雌酚特异性抗体、包被原、标准品溶液、发光液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液、包被缓冲液、封闭液和酶标抗抗体组成。

3.根据权利要求1或2所述的化学发光免疫试剂盒，其特征在于：

所述己烯雌酚特异性抗体为己烯雌酚单克隆抗体或己烯雌酚多克隆抗体；

所述己烯雌酚单克隆抗体是由保藏号为CGMCC No.3775的对己烯雌酚的单克隆杂交瘤细胞株DES分泌的抗体。

4.根据权利要求1-3任一所述的化学发光免疫试剂盒，其特征在于：所述标准品溶液中标准品的浓度为0μg/L、0.5μg/L、1μg/L、5μg/L、10μg/L或50μg/L，所述标准品为己烯雌酚；

所述发光液由C液和D液组成，发光液C液为过氧化氢；发光液D液为鲁米诺溶液；

所述浓缩洗涤液是将0.05g叠氮钠防腐剂和100mL浓度为0.02M、pH为7.4的磷酸盐缓冲液混合得到溶液；

所述浓缩复溶液是将0.1g牛血清白蛋白和100mL浓度为0.05mol/L、pH为7.4的磷酸盐缓冲液混合得到的溶液；

所述包被缓冲液是pH值为9.6的浓度为0.03mol/L的碳酸盐缓冲液；

所述封闭液是将0.01g叠氮化钠、10g牛血清白蛋白和100mL浓度为0.03mol/L、pH值为7.4磷酸盐溶液混合得到的溶液。

5.根据权利要求1-4任一所述的化学发光免疫试剂盒，其特征在于：

所述包被原是按照如下方法制备得到的：a、将每18mg己烯雌酚半抗原、2.5mL二甲基甲酰胺、15μL三正丁胺和9μL氯甲酸异丁酯混合反应30min，得到的产物溶液称为A液；将每15mg载体蛋白溶于1mL 50％的二甲基甲酰胺水溶液(体积百分含量)中，调节pH至9，得到的产物溶液称为B液；

b、将A液加入到B液，4℃反应4h后，再经过透析得到包被原；

所述己烯雌酚半抗原的结构式如式II所示：

                                                    (式II)。

6.根据权利要求1-5任一所述的化学发光免疫试剂盒，其特征在于：

所述己烯雌酚半抗原是按照如下方法制备得到的：

I、先将每110mg己烯雌酚、200mg无水碳酸钠、50μL 4-溴丁酸乙酯和5mL丙酮混合得到混合物，II、将步骤I得到的混合物进行60℃回流提取4h，抽干反应液，得到残留物，III、再将步骤II得到的残留物溶解于5mL甲醇-氢氧化钾混合液后进行80℃回流提取1h，抽干反应液，再次得到残留物，IV、向步骤III得到的残留物中加入8mL水得到混合液，调节pH为3，离心收集沉淀；V、向步骤IV的沉淀加入5mL氯仿抽提，将有机相用硫酸钠干燥得到残留物；VI、将步骤V得到的残留物溶于沸氯仿，再加入石油醚重结晶，干燥后得到的产物即为己烯雌酚半抗原；所述甲醇-氢氧化钾液为将88mg氢氧化钾溶解于5mL甲醇得到的溶液。

7.根据权利要求1-6任一所述的化学发光免疫试剂盒，其特征在于：

所述载体蛋白为鼠血清白蛋白、牛血清白蛋白、卵清蛋白或血蓝蛋白，优选为卵清蛋白；

所述酶标记抗抗体为酶标记羊抗鼠抗抗体。