[发明专利]胎盘多肽注射液的多肽含量测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及药品的质量检测方法，特别是一种胎盘多肽注射液的多肽含量测定方法。

背景技术

胎盘在《本草纲目》上称为紫河车，具有“安神养血、补气、益精、解毒、补血的作用的功效，久服者，耳聪目明，须发黑，延年益寿，有夺造化之” 。紫河车作为药用已有数百年历史，且在不断延伸扩展。胎盘多肽注射液是以健康产妇的新鲜胎盘为原料，经先进的生物技术获得的小容量生物制剂，含有多种营养素、生长因子及免疫因子等，这些大量的活性成分帮助协调、提高自身免疫，增强新陈代谢，促进受损细胞和创伤 的自我修复和愈合。具有抗病毒、抗感染、抗过敏、抗突变、抗肿瘤、调节内分泌等治疗及预防保健作用。胎盘多肽注射液不但在临床上用于多种疾病的治疗和预防，还广泛用于医学美容等。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种胎盘多肽注射液的多肽含量测定方法，该测定方法简便、快速、准确率高，适用于大生产中对胎盘多肽注射液中多肽含量控制，从而确保了胎盘多肽注射液的疗效和临床应用的安全性。

本发明是这样实现的：胎盘多肽注射液的多肽含量测定方法，采用二辛可宁酸测定法，以牛血清蛋白为对照制备对照品溶液，向对照品溶液中加入定量的碱性铜试液，测定其吸光度，绘制标准曲线；按对照品溶液的方法制备胎盘多肽注射液的供试品溶液，并测定其吸光度；通过标准曲线法测定胎盘多肽注射液中多肽的含量。

牛血清蛋白的浓度为0.15～0.25mg/ml。

配制碱性铜试液所用试药包含二辛可宁酸，无水碳酸钠，酒石酸钠，氢氧化钠，碳酸氢钠，硫酸铜以及纯化水；配制方法为，将二辛可宁酸1.8～2.2g、无水碳酸钠3.2～3.8g、酒石酸钠0.3～0.35g、氢氧化钠0.6～1.0g以及碳酸氢钠1.8～2.0g分别加入到175～185ml的纯化水中溶解，得到混合溶液，用氢氧化钠溶液或碳酸氢钠调节混合溶液的pH值至10.75～11.5，再加入纯化水使混合溶液的总体积至190～210ml作为甲液；取硫酸铜0.8～1.2g，并加入纯化水溶解并稀释至20～30ml，作为乙液；临用前取50ml甲液和1ml乙液混匀，即得碱性铜试液。

绘制标准曲线，精密量取牛血清蛋白对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8及1.0ml，分别放置在具塞试管中，各加入纯化水至2.0ml，再加入碱性铜试液4.0ml混匀，在36.5～37.5℃的水浴中反应28～32min后，在常温下冷却至室温，测定吸光度，同时以空白溶液作对照，绘制标准曲线。

空白溶液的制备为，将纯化水2.0ml及碱性铜试液4.0ml混匀，并将其在36.5～37.5℃的水浴中反应28～32min后，在常温下冷却至室温，即得到空白溶液。

测定所用的吸收波长为562nm。

胎盘多肽注射液的取用量为2.0ml。

为了确保本发明含量测定方法科学、合理、可行，对其进行了一系列的试验研究和考察：

一、仪器与试药

1、仪器紫外分光仪（Agilent），水浴锅（北京光明医疗器械厂）等。

2、试药 胎盘多肽注射液（贵阳黔峰生物制品有限责任公司），牛血清蛋白（Sigma公司），二辛可宁酸（Sigma公司），无水碳酸钠、酒石酸钠、氢氧化钠、碳酸氢钠和硫酸铜均为国产分析纯，纯化水为自制。

二、试验方法及结果

1、碱性铜试液配制

取二辛可宁酸2.0g、无水碳酸钠3.54g、酒石酸钠0.32g、氢氧化钠0.8g和碳酸氢钠1.9g，分别将它们加入180ml纯化水溶解，得到混合溶液，用氢氧化钠溶液或碳酸氢钠溶液调节混合溶液的pH值至11.25，加水至200ml作为甲液；取硫酸铜1.0g加纯化水溶解并稀释至25ml作为乙液。临用前，取50ml甲液和1ml乙液混匀，即得到试验所需的碱性铜试液。

2、对照品溶液的制备

精密称取牛血清蛋白对照品10mg，置50ml量瓶中，加纯化水适量，溶解，稀释至刻度，即得。

3、标准曲线绘制及曲线方程

精密量取牛血清蛋白对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分别置于具塞试管中，各加入纯化水至2.0ml，再加入碱性铜试液4.0ml混匀，在37±0.5℃水浴反应30±2min，在常温下冷却至室温，同时以空白溶液作对照，按分光光度法（中国药典2005年版二部附录Ⅳ A）在562nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，对照品的量为横坐标绘制标准曲线，并求出标准曲线方程。

4、含量测定