[发明专利]表达盒、其转基因鱼及应用

说明书

技术领域

一般而言，本发明涉及表达盒、转基因鱼及其特别是在检测雌激素和抗雌激素化合物，监测环境中的雌激素样活性以及研究肝脏的再生中的应用。

背景技术

现发现曾被视为安全的很多化学物质具有扰乱内分泌系统的活性，并且在生物体内导致不良反应。这些种类的化学品在环境中的广泛存在已近引起了全世界的关注。因为有关这些物质对雄性生物的雌激素效应的报道越来越多，所以大部分研究工作集中于雌激素样内分泌干扰物。

重要的是获得用于鉴定能够模拟雌激素或干扰雌激素内分泌系统的化学物质的快速、敏感、经济且可定量的方法，此方法能够有助于评估这些化学物质对生物体的生物效应。在现有技术的方法中，已研究了体外细胞系分析和体内转基因鱼分析。细胞系分析能够快速且敏感，但不能提供关于测试物质对生物体的毒理动力学和毒理代谢动力学作用的信息。目前，转基因鱼分析能够克服细胞系分析的一些缺陷。然而，现有转基因鱼的局限性在于它们都是淡水物种，不能在海洋环境中使用。

发明内容

本发明一方面涉及表达盒，其包含：(i)编码报告蛋白的报告核苷酸序列；(ii)从青鳉鱼(medaka fish)分离的雌激素反应5′-调控核苷酸序列，其中所述调控核苷酸序列可操作地连接到所述报告核苷酸序列的5′端，以在雌激素或雌激素样化合物存在下诱导报告蛋白表达；和(iii)可操作地连接到所述报告核苷酸序列3′端的3′-调控区。

本发明的另一方面涉及包含本发明表达盒的转化载体。

本发明的另一方面涉及转导有本发明表达盒的宿主细胞。

本发明的另一方面涉及水生动物的转基因细胞，其中所述转基因细胞包含至少一个本发明的表达盒。

本发明的另一方面涉及包含至少一个本发明表达盒的转基因鱼。在接触到包含雌激素或雌激素样化合物的液体介质时，所述转基因鱼表现出可观测的标记。所述可观测的标记包括由所述至少一个表达盒表达的报告蛋白。

本发明的另一方面涉及用于检测液体介质中存在雌激素或雌激素样化合物的转基因鱼的制备方法。此方法包括使用本发明的表达盒转化非转基因鱼，从而获得包含至少一个所述表达盒的转基因鱼。

本发明的另一方面涉及筛选液体介质中雌激素物质的方法。

本发明的另一方面涉及筛选液体介质中雌激素物质的方法。此方法包括使本发明的转基因鱼接触待测(即用于检测雌激素物质的存在)的液体介质。在此接触步骤后，此方法包括检测所述转基因鱼是否表现出通过诱导(包含在所述转基因鱼体中的)报告基因的表达产生的可观测的标记。存在可观测的标记表明所述液体介质包含雌激素物质。

本发明的另一方面涉及筛选具有抗雌激素活性的化合物的方法。此方法包括以下步骤：(a)提供本发明的第一转基因鱼和第二转基因鱼，其中所述第一转基因鱼和第二转基因鱼为相同的种，并且处于基本相同的发育阶段；(b)使所述第一转基因鱼接触第一液体介质，其中所述第一液体介质包含雌激素或雌激素样化合物；(c)使所述第二转基因鱼接触第二液体介质，其中所述第二液体介质包含第一液体介质和测试化合物；和(d)将所述第一转基因鱼表现出的任何可观测的标记的定量强度与所述第二转基因鱼表现出的任何可观测的标记的定量强度进行比较，其中与所述第一转基因鱼中可观测的标记的定量强度相比，所述第二转基因鱼中可观测的标记的定量强度下降表明所述测试化合物具有抗雌激素活性。

本发明的另一方面涉及用于研究雌激素化合物对肝脏再生的影响的方法。总体而言，此方法包括：对本发明的成体转基因鱼进行部分肝切除，其中所述部分肝切除是有效去除所述转基因鱼的部分肝脏；使所述转基因鱼接触包含测试雌激素化合物的测试液体介质；和分析所述转基因鱼的肝脏以检测肝组织的任何再生。

与研究单一的雌激素化合物相反，本发明的另一方面涉及用于研究不同雌激素化合物对肝脏再生的影响的方法。总体而言，此方法包括以下步骤：(a)提供本发明的第一转基因鱼和第二转基因鱼，其中所述第一转基因鱼和第二转基因鱼为相同种的成体鱼；(b)使所述第一转基因鱼接触包含第一测试雌激素化合物溶液的第一液体介质；(c)使所述第二转基因鱼接触包含第二测试雌激素化合物溶液的第二液体介质；(d)量化所述第一转基因鱼和所述第二转基因鱼表现出的任何可观测的标记的强度；(e)对所述第一转基因鱼和第二转基因鱼进行部分肝切除，其中所述部分肝切除是有效去除所述第一转基因鱼和第二转基因鱼的部分肝脏；(f)重复此方法的步骤(b)到步骤(d)；和(g)分析所述第一转基因鱼和第二转基因鱼的肝脏以比较所述第一液体介质和所述第二液体介质中包含的雌激素化合物对肝组织任何再生的影响。

附图说明