[发明专利]苦参碱类化合物在制备抗前列腺肿瘤药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种苦参碱类化合物在制备抗前列腺肿瘤药物中的应用。

背景技术

开发中药及中药中的药效成分成为治疗前列腺肿瘤的药物，目前国内外均有开展。现有批准用于临床的中药，均为复方药，对前列腺肿瘤的治疗为中药的复合疗效，既有调理作用，又有治疗作用。对中药材中单一成分治疗前列腺肿瘤药物的研究，目前均处于肿瘤细胞体外试验阶段，疗效的确切性还比较模糊。

发明内容

本发明提供苦参碱类化合物在制备抗前列腺肿瘤药物中的应用，所述苦参碱类化合物为如式I所示的苦参碱或如式II所示的苦参素：

I

                II  。

如式II所示的苦参素为苦参碱的氧化物，又称氧化苦参碱。

本发明采用前列腺特异性抗原(Prostate Specific Agtigen，缩写为PSA)对苦参碱或苦参素进行了筛选验证，实验结果表明苦参碱或苦参素对前列腺特异性抗原有明确抑制作用，因此可以应用于制备抗前列腺肿瘤药物。

筛选验证实验的原理是，前列腺特异性抗原是由前列腺产生的一种丝氨酸蛋白酶，有一个多肽单链与一个糖链组成，自20世纪80年代中期开始已被国内外广泛用作前列腺癌的标记物，因为PSA能裂解胰岛素样生长因子结合蛋白3 (Insulin-like Growth Factor-Binding Protein3，缩写为IGF-BP3)，IGF-BP3是细胞生长调控与肿瘤转移相关的蛋白质。因而，有明确抑制PSA的植物成分就具有确切的抗前列腺肿瘤的疗效，从而能较好的开发成治疗前列腺肿瘤的植物药。

较为具体的，抗前列腺肿瘤的植物成分按以下技术方法筛选得到：

用缓冲液(pH 7.6的50 mM三羟甲基氨基甲烷与200 mM NaCl缓冲液)配制PSA浓度为2.4 mg/ml，配制胰蛋白酶浓度为0.6 mg/ml。取100μL PSA溶液加60μL胰蛋白酶溶液在37℃的缓冲液中作用1.5 min，上述反应加入5μL预先洗涤过的苄脒琼脂糖凝胶-6B(20μL苄脒琼脂糖凝胶-6B用40 μL缓冲液洗涤，随后用台式离心机高速10000rpm离心2min，去除浮在离心管表面的物质，洗涤和离心过程重复3次)终止。反应终止后，在室温下持续5min。琼脂糖凝胶用高速台式离心机在室温下离心分离5min。离心分离重复直到在离心管表面液体中没有明显可见的凝胶残留，得到经胰蛋白酶作用有活性的PSA。

取3μg IGFBP-3用pH 7.6的50 mM三羟甲基氨基甲烷与200 mM NaCl缓冲液配制成9μL ，取2μL经胰蛋白酶作用有活性的PSA (计3μg) ，混合后在37℃的缓冲液中作用1.5h，得到IGFBP-3的分解物。IGFBP-3的分解物用5%浓缩胶（1.34mL 30%的丙烯酰胺-亚甲双丙烯酰胺双蒸水溶液，1.0mL pH6.8的1.0M三羟甲基氨基甲烷-HCl缓冲液，0.08mL 10%十二烷基硫酸钠溶液，0.08mL 10%过硫酸铵双蒸水溶液，8μL四甲基乙二胺在5.50mL双蒸水中混合均匀）-12%分离胶（6mL 30%的丙烯酰胺-亚甲双丙烯酰胺双蒸水溶液，3.75mL pH8.8的1.5M浓度三羟甲基氨基甲烷-HCl缓冲液，0.15mL 10%十二烷基硫酸钠溶液，0.15mL 10%过硫酸铵双蒸水溶液，6μL四甲基乙二胺在4.95mL双蒸水中混合均匀）的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，用考马斯亮蓝染色。

在pH 7.6的50 mM三羟甲基氨基甲烷与200 mM NaCl缓冲液中配入纯度在90%以上待验证的植物成分，使植物成分的浓度为300~750μM，得到样品溶液。向样品溶液中加入2μL经胰蛋白酶作用有活性的PSA (计3μg)，在37℃反应30min，反应混合液加入9μL用pH 7.6的50 mM三羟甲基氨基甲烷与200 mM NaCl缓冲液配制成的IGFBP-3 (计3μg)，作用1.5h。反应时间达到后将反应液冰冻在–70℃的冰箱终止反应。待验证的植物成分对PSA的抑制作用用5%浓缩胶-12%分离胶的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。IGFBP-3的分解物在电泳检测中越少，说明抑制作用越强，表明该植物成分抗前列腺肿瘤的疗效越明确。