[发明专利]桔黄假单胞菌的培育方法及应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术，具体地说是一种桔黄假单胞菌的培育方法及应用。

背景技术

植物病害造成农作物品质变差、产量下降，给农业生产和食品安全带来了巨大的经济损失和安全隐患。现有技术植物病害的防治方法主要是利用农药的化学防治。化学药剂具有防治速度快、效果好、杀虫抗菌谱广、成本低、使用简单的优点。现有的化学防治缺点是：长期使用破坏生态平衡、造成次要病害猖獗、药剂残留导致环境污染等问题。

植物病害的生物防治是利用对植物无害或有益的生物来影响或抑制病原物的生存和活动，减少病害的发生或降低病害的发展速率的方法。生物防治不仅有效地控制了农作物病害，又促进了农业的可持续发展，是一种保护生态环境、提高农作物产量和品质的好方法。假单胞菌是一种植物根际促生菌(Plant Growth-promoting Rhizobacteria，PGPR)，能够通过多种方式促进植物生长，同时分泌抗病物质抑制土壤中植物病原菌繁殖，控制植物病害发生。

现有技术发现桔黄假单胞菌对多种植物致病菌有抑制作用(Rosas BS等，Phyton-Revista Internacional de Botanica Experimental，2001，67：203-209)；Rosas和Rovera等人(Carlier E，Rovera M等World JMicrobiol Biotechnol，2008，24：2653-2658)研究发现，桔黄假单胞菌SR1通过产生铁载体、拮抗蛋白、氢氰酸(HCN)、植物激素类似物等来抑制植物病原菌、促进植物的生长。Feklistova和Maksimova(Feklistova IN等，Bulletin of BSU，chemistry，biology，Geography，2005，2：29-31)发现，桔黄假单胞菌还能合成吩嗪类物质(phenazines)起到生物防治的作用。现有桔黄假单胞菌的缺点是：桔黄假单胞菌自然界中存在数量少，繁殖速度慢，无法满足植物防治病害、促进植物生长的需要，无法满足农业生产中减轻作物病害、提高作物产量的需要。所以发明一种对人畜无毒、生态环境友好、对多种植物病原菌有良好防治效果，并能促进植物生长的桔黄假单胞菌新菌种对于保护环境、促进植物生长和农业发展有着重要的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种对人畜无毒、生态环境友好、对多种植物病原菌有良好防治效果，并能促进植物生长的桔黄假单胞菌种。

本发明的另一目的是提供桔黄假单胞菌在防治油菜、水稻、小麦、蕃茄、玉米病害中的应用。

本发明的目的是这样实现的：

桔黄假单胞菌的培育方法，步骤如下：

(1)试样采集：从上海市嘉定区红薯作物的根际土壤，深度5cm-15cm，采集土样，风干，贮存于塑料袋中，置于冰箱4℃保存备用；

(2)制备培养基：

①KB液体富集培养基：蛋白胨20g、甘油10mL、K₂HPO₄ 1.5g、MgSO₄·7H₂O 1.5g、去离子水1L，混合静置；

②固体富集培养基：蛋白胨20g、甘油10mL、K₂HPO₄ 1.5g、MgSO₄·7H₂O1.5g、去离子水1L、琼脂18g，混合静置；

③斜面保藏培养基：蛋白胨10g、NaCl 10g、酵母膏5g、琼脂18g、去离子水1L，混合静置；

④真菌培养基：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、去离子水水1L，混合静置；

⑤固体真菌培养基：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂38g、去离子水水1L，混合静置；

(3)抗生素和供试病原真菌：

①抗生素：氨苄青霉素贮存浓度50mg/mL，氯霉素贮存浓度34mg/mL；

②供试病原真菌：油菜菌核病菌Sclerotinia sclerotiorum、水稻纹枯病菌Rhizoctonia solani、小麦赤霉病菌Fusarium graminearum、番茄灰霉病菌Botrytis cinerea、玉米小斑病菌Bipolaris maydis；

(4)菌种筛选：

①菌株分离、纯化与保存：

将采集试样放入含有氨苄青霉素40μg/mL与氯霉素13μg/mL的1/3KB液体富集培养基培养6-8小时；